Wat is de PCR-analyse voor tuberculose

Een innovatieve methode voor de detectie van micro-organismen, bedacht door de wetenschapper Cary Mullis aan het eind van de vorige eeuw - PCR-analyse. Hij ontving voor zijn geschriften de Nobelprijs. Volledig dit proces wordt polymerasekettingreactie genoemd. Het bestaat uit het herstel van het type micro-organisme in het geleverde biomateriaal met behulp van korte DNA-fragmenten. Hiermee kunt u infecties in een vroeg stadium opsporen en onmiddellijk met de behandeling beginnen, zonder dat dit leidt tot ernstige symptomen en complicaties.

Wat is de analyse

Diagnose door PCR is om segmenten van pathogeen DNA uit biologisch materiaal te verkrijgen en ze in de juiste keten uit te lijnen. Dit maakt de identificatie mogelijk van het micro-organisme waartoe de cellen behoren.

De procedure wordt uitgevoerd in drie fasen:

1. Verzameling van biologisch materiaal.
2. Identificatie en uitlijning van DNA.
3. Erkenning van infectie.

Deze studie vereist speciale medische apparatuur - amplificerend. Het is uitgerust met een camera, waar het bestudeerde materiaal interageert met hoge temperatuur en chemische enzymen. Bij de uitgang heeft de laborant een lange DNA-keten van het veroorzakende agens, als er een in het menselijk lichaam is.

Hoe zich voor te bereiden op de diagnose

PCR-analyse is een complex genetisch engineeringproces dat nauwkeurigheid en ernst vereist van zowel laboratoriumtechnici als patiënten. Een grote rol in de juistheid van de analyseresultaten wordt gespeeld door de voorbereiding op de procedure, dat wil zeggen, de juiste verzameling van materiaal.

De belangrijkste bronnen van informatie over de ziekte zijn:

Andere opties kunnen worden gebruikt, vloeistoffen worden, indien nodig, genomen voor analyse vanuit verschillende organen.

Voor de patiënt zijn er bepaalde regels die vóór de procedure moeten worden gevolgd. Als er een bloedtest is, is het verboden om dit 8 uur vóór de inname te doen:

• eet voedsel;
• roken;
• alcoholische dranken drinken;
• neem medicatie mee naar binnen.

'S Avonds, voor het verzamelen van sputum, is het medicijn dronken om het te verdunnen en het slijm te vergemakkelijken. Verzamel het materiaal 's morgens na een grondige hygiëne van de mondholte.

Urine wordt 's morgens op een lege maag, na het wassen, in een steriele pot verzameld voordat medicatie wordt ingenomen.

Als een persoon antibiotica gebruikt, moet de analyse van de polymerasekettingreactie worden uitgesteld, anders is het PCR-resultaat niet betrouwbaar. Sputum of bloed moet twee weken na afloop van de behandeling worden gedoneerd.

Hoe verloopt het proces van het identificeren van bacteriën

In het kort gezegd, het proces is om een ​​deel van het DNA te isoleren. Het gebruik van moderne methoden van genetische manipulatie stelt ons in staat om het type micro-organisme te bepalen. Bovendien heeft het materiaal voor de analyse een kleine hoeveelheid nodig.

Technisch gezien is dit een zeer ingewikkelde procedure, maar het kost minder tijd dan klassieke bacteriologische onderzoeken. Ziekteverwekkers hoeven niet te worden geïsoleerd van het biomateriaal, het is niet nodig om ze enkele weken te laten groeien. Op de dag van aflevering kan de patiënt het resultaat van zijn analyse al kennen.

Het hele proces van PCR verloopt in fasen:

1. Er wordt gewerkt aan de primaire vorm van DNA, die bij hoge temperatuur, dicht bij 100 graden, is verdeeld in twee ketens.
2. De temperatuur neemt af, de draden zijn verbonden met de nucleïnezuurfragmenten - de primer.
3. Elongatie treedt op - synthese van moleculaire structuur.

De hele sessie bestaat uit ongeveer dertig van dergelijke procedures, waarbij een cyclus wordt herhaald als een kettingreactie. Dit is nodig om het aantal cellen te creëren waarin de resulterende bacteriën herkenbaar worden.

Conclusie van de studie

Beschrijving van het resultaat van PCR (polymerase kettingreactie) geeft een tbc-arts, het is eenvoudig of ingezet. In het eerste geval zal de beschrijving alleen informatie bevatten over de aanwezigheid of afwezigheid van Koch-sticks. Als de decodering gedetailleerd is, kun je daaruit de omvang van de ziekte, de focus ervan, achterhalen. Volgens deze criteria is het mogelijk om in elk afzonderlijk geval de meest geschikte behandeling voor tuberculose te bepalen.

De polymerase-analyse van de kettingreactie maakt geen onderscheid tussen levende en dode pathogenen en spreekt alleen van hun aanwezigheid. Daarom is het zinvol om pas na 3-4 weken na de door de arts voorgeschreven therapie een tweede test voor tuberculose te geven.

Als het resultaat positief is, wordt de inscriptie "Mycobacterium tuberculosis" geconcludeerd. Als er een negatief resultaat is, is er naast de biologische naam van de bacterie een teken "niet gedetecteerd". Analyses kunnen vals-positief zijn. Dit gebeurt zelden - in geval van schending van de techniek van het uitvoeren van PCR-studies of in de aanwezigheid van niet-levensvatbare micro-organismen. De uiteindelijke conclusie over de ziekte kan alleen worden gemaakt door een tbc-arts.

Voordelen van de methode

PCR-diagnostiek van tuberculose is om vele redenen populair geworden. Het heeft veel voordelen, waaronder:

1. Nauwkeurigheid van onderzoek. Bij het analyseren van technologie is het mogelijk om bacteriën te identificeren, zelfs als ze in kleine hoeveelheden aanwezig zijn.
2. Snel resultaat Het hele proces van het verzamelen van het materiaal tot het voltooien van de conclusie duurt ongeveer 5 uur. In vergelijking met zaaien, moet het tot enkele weken wachten.
3. Volledige veiligheid voor de persoon, in tegenstelling tot fluorografie met zijn straling.
4. Elk vloeibaar biomateriaal wordt gebruikt. Voor de implementatie van PCR in pulmonale tuberculose geeft sputum de meest nauwkeurige informatie: bij tuberculeuze meningitis wordt een monster uit het ruggenmerg genomen. Een bloedtest helpt om lokale foci van infectie te identificeren.
5. De gevoeligheid van bacteriën voor antibiotica wordt getest. Hiermee kunt u de juiste behandeling voorschrijven.
6. Vroege diagnose. U kunt leren over de aanwezigheid van de ziekte vóór het optreden van de symptomen.

Naast de positieve aspecten zijn er ook nadelen. De belangrijkste is de prijs. Analyse van PCR is niet goedkoop, wat geassocieerd is met het gebruik van dure apparatuur. Een ander nadeel is de noodzaak om te wachten op de tijd voor een nieuwe test na een behandeling voor tuberculose. Soms is het testresultaat vals-positief. Dit gebeurt als gevolg van bacteriële mutatie.

Wanneer PCR nodig is

PCR voor longtuberculose heeft geen contra-indicaties en is absoluut veilig. Daarom zijn er bepaalde situaties en ziekten wanneer dit de enige mogelijkheid van onderzoek is.

Deze omvatten:

• zwangerschap;
• contact met een tuberculeuze patiënt;
• moeilijkheden bij het bepalen van de diagnose van longziekte;
• onderzoek voor de operatie;
• allergische reactie;
• HIV-infectie;
• jonge leeftijd.

U kunt de PCR-methode gebruiken in de richting die wordt gegeven in de phthisiology, evenals een kinderarts, arts of longarts.

Wat kan de PCR-diagnose van tuberculose vervangen?

Andere soorten enquêtes zijn niet verouderd, maar worden nog steeds gebruikt. Ze worden gebruikt in gevallen waarin het niet mogelijk is om PCR voor tuberculose uit te voeren. Bovendien is de moderne methode niet ideaal, soms worden de indicatoren in twijfel getrokken en moeten ze opnieuw worden gecontroleerd.

De volgende methoden helpen bij het bepalen van de aanwezigheid van tuberculose bij een persoon:

• tuberculine diagnose (Mantoux);
• röntgenfoto van de borstkas;
• testen van biologisch materiaal voor flora;
• röntgenfoto van de longen.

Deze onderzoeken zijn gratis en voor iedereen beschikbaar. Maar ze hebben hun nadelen:

• De tuberculose-test veroorzaakt allergieën. Gecontra-indiceerd bij huidziekten.
• Röntgenonderzoeken gaan gepaard met straling, die niet van toepassing is op kinderen, mensen met immunodeficiëntie en zwangere vrouwen.
• Bacteriologische analyses nemen veel meer tijd in beslag, het resultaat kan tot een maand worden gewacht.

Alternatieven zijn geen garantie voor honderd procent juiste conclusie. Ze worden meestal gebruikt voor preventieve doeleinden. Diagnose van tuberculose door PCR geeft de meest betrouwbare informatie. Als het mogelijk is, is het beter om het te gebruiken.

Eigenaardigheden van tuberculose bij kinderen en de behoefte aan PCR

Het kind moet vooral worden beschermd tegen de ziekte - tuberculose-infectie kan ernstige schade aan het lichaam veroorzaken met een nog niet volledig gevormde immuniteit.

Na het betreden van Koch's toverstok in het kinderorganisme, doorloopt de ontwikkeling van de ziekte de volgende stadia:

• Latent. Het duurt maximaal een jaar, zonder symptomen te geven.
• Intoxicatie. Beïnvloedt de algehele gezondheid. Verschijnt zwakheid, apathie, gebrek aan eetlust, slaperigheid en verminderde prestaties. Constant iets verhoogde temperatuur.
• De primaire vorm van de ziekte. Tuberculose is gelokaliseerd en vormt de focus van de ziekte. Het kind hoest, heeft kortademigheid, hoofdpijn, gezwollen lymfeklieren.
• Tuberculaire bronchoadenitis. Symptomen zijn pijn in de schouderbladen, hoesten met verschillende toonhoogten, piepende ademhaling.

Meestal wordt tuberculine geïnjecteerd om de infectie onder de huid van een kind te identificeren. Als dit type onderzoek gecontra-indiceerd is, dan is PCR voor tuberculose een onmisbare optie voor diagnose. Kinderen nemen meestal een bloedtest, maar sputum wordt indien nodig verzameld. Bij het geringste vermoeden van de aanwezigheid van tuberculose, worden aanvullende onderzoeken uitgevoerd om een ​​positief resultaat te garanderen en onmiddellijk met de behandeling te beginnen in een vroeg stadium, waarbij de ontwikkeling van de ziekte wordt voorkomen.

Moderne onderzoeksmethoden zijn altijd sneller en betrouwbaarder. Het is jammer dat vanwege de dure apparatuur om dergelijke tests uit te voeren er een mogelijkheid is niet in alle medische instellingen en plaatsen. Hoe het onderzoek wordt uitgevoerd, wordt meestal door de arts gekozen, maar de patiënt heeft het recht om te kiezen. Als je een PCR-test moest doen, vertel het ons dan in de comments. Als het artikel nuttig voor u was, deel het dan op sociale netwerken - misschien helpt het uw vrienden.

Wat is PCR voor tuberculose en hoe maak je een test?

PCR voor tuberculose wordt voorgeschreven wanneer het onmogelijk is om een ​​diagnose te stellen of het is onmogelijk om andere onderzoeken uit te voeren. De analyse maakt het mogelijk om de Koch-staf in de vroegste stadia te identificeren en de behandeling tijdig te starten.

Beschrijving van PCR voor tuberculose

Indicaties voor PCR-diagnostiek

Typen PCR voor tuberculose

Voorbereiding voor de analyse

Hoe is PCR voor tuberculose

Interpretatie van onderzoeksresultaten

Eigenaardigheden van PCR voor tuberculose bij kinderen

Hoeveel kost PCR voor tuberculose?

Opmerkingen en recensies

Beschrijving van PCR voor tuberculose

PCR (polymerasekettingreactie) voor tuberculose is een nauwkeurige analyse die een Koch-staf in een paar uur kan detecteren. Diagnostiek is gebaseerd op genetische manipulatiemethoden. Artsen isoleren de DNA-cel met behulp van de gen-moleculaire tests om het type pathogenen te bepalen.

Voordelen van de methode

• kunt u de ziekteverwekker in de vroege stadia identificeren, zonder de manifestatie van zichtbare symptomen;
• diagnostiek heeft geen contra-indicaties en is toegestaan ​​voor kinderen;
• onderzoek kan worden uitgevoerd bij het nemen van de minimale hoeveelheid materiaal.
• universaliteit van onderzoek van biomaterialen;
• Het onderzoek is effectief bij het bepalen van de herhaling van de ziekte.

Nadelen van de methode

Naast de voordelen hebben PCR-studies ook nadelen.

De belangrijkste zijn:

1. De studie is niet overal waar je kunt slagen. Omdat de apparatuur voor een dergelijke diagnose duur is, wordt deze in betaalde laboratoria geïnstalleerd.
2. PCR voor tuberculose kan een positieve respons geven als het dode mycobacteriën detecteert, bijvoorbeeld na de behandeling.
3. Mutaties van pathogenen verminderen significant de effectiviteit van de PCR-methode, omdat DNA-strengen niet in staat zijn sequentieel te synthetiseren.
4. De noodzaak om zorgvuldig biomateriaal te selecteren voor analyse.

Indicaties voor PCR-diagnostiek

Stuur naar de enquête voor de volgende indicaties:

1. Als er ten minste één contact was met een patiënt met tuberculose en het moeilijk is om de ziekte te identificeren met behulp van standaardtests.
2. Er zijn situaties waarin het niet mogelijk is om een ​​persoon voor röntgenfoto's of andere onderzoeken te brengen. In dergelijke gevallen is het veel gemakkelijker om het sputum af te geven.
3. De analyse wordt aan de vooravond van de komende operatie aangesteld, wanneer het nodig is om te bepalen of een persoon ziek is of niet.
4. Als de patiënt een twijfelachtig resultaat van de Mantoux-reactie heeft.
5. Toewijzen aan zwangere vrouwen en kinderen om blootstelling aan röntgenfoto's te voorkomen.

Typen PCR voor tuberculose

De keuze van biomateriaal voor screening op tuberculose moet individueel worden benoemd.

Voor de diagnose van PCR voor tuberculose kunnen tests worden uitgevoerd:

Bloedonderzoek

Kenmerken van de bloedtest voor tuberculose:

1. Uitgevoerd in gevallen waarin andere diagnoses niet geschikt zijn of gecontra-indiceerd. Als u bijvoorbeeld een juiste diagnose wilt stellen, moet u meer dan één röntgenfoto maken. Overmatige blootstelling is niet veilig voor het lichaam, dus het is veel gemakkelijker om bloed van een patiënt te nemen.
2. Ook kan de arts richting geven aan het bloed bij het ontvangen van controversiële resultaten na fluorografie.

Speeksel analyse

1. De analyse van speeksel is minder populair en informatief dan andere studies, omdat tuberculose geen invloed heeft op de speekselklieren. Daarom zal in de meeste gevallen het resultaat negatief zijn.
2. De methode is gericht op het identificeren van pulmonaire en extrapulmonale vormen.
3. Als de kleur van het monster niet verandert door de werking van het reagens, betekent dit dat er geen pathogenen zijn. Als er desondanks een vermoeden van een ziekte opduikt, wordt er een extra complex van analyses uitgevoerd.

Sputum-analyse

Sputum-analyse is het meest informatief voor het detecteren van tuberculosepathogenen. Monsters worden verschillende keren genomen, in de regel is driemaal voldoende. Dit elimineert de mogelijkheid van fouten bij het verkrijgen van materiaal van slechte kwaliteit.

Als een persoon is geïnfecteerd met tuberculose, zal sputum in kleine hoeveelheden worden vrijgegeven samen met de hoest. Bij patiënten in het vergevorderde stadium van de ziekte, zal het slijm worden uitgescheiden met bloedige vlekken.

Het wordt niet aanbevolen om sputum te nemen voor onderzoek als de patiënt een vermoeden heeft van tuberculose van de botten of het zenuwstelsel.

Urine analyse

Urineonderzoek is een van de manieren om extrapulmonale vormen van de ziekte te detecteren: niertuberculose en urinewegen.

In het geval van de longvorm van de ziekte, is de algemene analyse van urine praktisch niet-informatief, aangezien geen uitgesproken pathologische veranderingen worden waargenomen.

Uit de video kun je zien welke arts de diagnose tuberculose stelt. Gefilmd door kanaal tuberculum. ru.

Voorbereiding voor de analyse

Bij het uitvoeren van een bloedtest moet de PCR een aantal regels volgen om een ​​betrouwbaar resultaat te verkrijgen:

• Het wordt aanbevolen om een ​​analyse uit te voeren op een lege maag;
• zou alcohol moeten uitsluiten aan de vooravond van de enquête;
• je moet 15-20 dagen voor de analyse klaar zijn met het innemen van antibiotica;
• Het wordt aanbevolen om een ​​uur voor het bloedafname niet te roken.

Bij het nemen van een sputum voor onderzoek is het ook aan te raden om een ​​aantal regels te volgen:

• het materiaal wordt 's morgens verzameld, daarom poetsen ze hun tanden en spoelen de mondholte grondig;
• als sputum niet goed beweegt, wordt het aanbevolen om 's avonds een slijmoplossend middel in te nemen of in te ademen;
• Het is noodzakelijk om 15 dagen vóór het onderzoek te stoppen met het nemen van antibiotica.

Om een ​​betrouwbaar resultaat van urine-analyse te verkrijgen, wordt de patiënt aangeraden zich te houden aan de volgende regels:

• materiaal moet 's ochtends worden verzameld;
• aan de vooravond wordt het niet aanbevolen voedingsmiddelen te eten die de kleur van de vloeistof kunnen veranderen (rode biet, blauwe bes en andere);
• Stop met het nemen van antibiotica gedurende 15 dagen vóór het onderzoek.

Hoe is PCR voor tuberculose

Kenmerken van de materiaalinname:

1. Een bloedtest wordt 's morgens bij een patiënt afgenomen van een ader in het laboratorium.
2. Voor afgifte van sputum op slijm is het noodzakelijk noodzakelijk uit het strottenhoofd en bij voorkeur zonder een grote hoeveelheid speeksel. Haar patiënt moet in een speciale steriele container spuwen en vervolgens aan de studie overhandigen.
3. Artsen nemen een scraping met een speciaal hulpmiddel uit de wangmucosa.
4. Urine wordt in een speciale container gehuurd. Neem het middengedeelte van het ochtendgedeelte.

Moleculair genetische reactie door PCR wordt uitgevoerd met behulp van een speciaal apparaat dat een amplificator wordt genoemd. Om de nodige DNA-segmenten te bestuderen, die de synthese van moleculen begint.

De techniek bestaat uit vier fasen:

1. Aanvankelijk wordt het benodigde biomateriaal verzameld voor onderzoek (bloed, sputum en speeksel).
2. Vervolgens wordt het monster verwarmd tot een temperatuur van maximaal 98 graden en niet meer dan twee minuten. Zo wordt de primaire vorm van DNA-genetica vernietigd en worden twee ketens gevormd.
3. Vervolgens komt het uitgloeien of verlagen van de temperatuur, waardoor de primer aan de DNA-streng bindt.
4. De laatste fase wordt uitgerektheid genoemd. Dit is de synthese van moleculen, wat leidt tot het eindresultaat.

Je moet 25-30 van dergelijke cycli spenderen om een ​​bepaald aantal kopieën van het DNA van virussen te krijgen. De veroorzakers van de ziekte worden door hen bepaald.

De informatie-inhoud en betrouwbaarheid van PCR-diagnostiek is 100%.

Interpretatie van onderzoeksresultaten

De productietijd van de analyse is ongeveer 5-6 uur.

Diagnostiek door de PCR-methode geeft 2 varianten van resultaten:

1. Gevonden. In het materiaal dat werd onderzocht, werd het DNA van het tuberculeuze middel gedetecteerd. De kans op infectie is 97%. Dergelijke patiënten worden snel naar een tbs-apotheek gestuurd, waar de behandeling zal worden uitgevoerd.
2. Niet gedetecteerd. Een negatief antwoord geeft de afwezigheid van de veroorzaker aan.

Als het resultaat positief is, voert de arts een gedetailleerde decodering uit, die het stadium en de focus van de ziekte bepaalt.

Fotogalerij

Eigenaardigheden van PCR voor tuberculose bij kinderen

PCR wordt voorgeschreven als het resultaat van een Mantoux-test onzeker is of bij de geringste verdenking van infectie. Het verstrekken van de procedure is veilig voor kinderen.

PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen en volwassenen: aanwijzingen voor

De Wereldgezondheidsorganisatie erkende 20 jaar geleden dat de verspreiding van tuberculose uit de hand gelopen was en de omvang van een epidemie bereikte. Sindsdien is de situatie niet verbeterd. Jaarlijks worden meer dan een miljoen gevallen van de ziekte gediagnosticeerd, waarvan bijna een kwart dodelijk is. In het laatste decennium is de incidentie van kinderen toegenomen, de meeste vormen van de ziekte lenen zich niet voor standaard antibiotische therapie.

Tegenwoordig is een van de wereldwijde taken voor de geneeskunde de ontwikkeling van dergelijke diagnostische methoden die het mogelijk maken om pathologie te identificeren vóór het begin van uitgesproken klinische symptomen. Een daarvan is de polymerasekettingreactie (PCR) voor tuberculose, die helpt om Koch-ziekteverwekkende sticks in bloed, sputum en andere biologische vloeistoffen te detecteren.

Diagnose van tuberculose

Screeningtests zijn gericht op het detecteren van patiënten, dragers van tuberculose en het voorkomen van de verspreiding van infecties in de samenleving. Voor kinderen onder de 14 jaar wordt de Mantoux-test massaal gebruikt. Dit is een immunologische test waarbij een dosis tuberculine subcutaan wordt geïnjecteerd - een complex mengsel van het genetisch materiaal van verschillende soorten mycobacteriën. Het verschijnen van een uitgesproken reactie duidt op een actief voorkomend infectieus proces.

Voor preventief onderzoek bij volwassenen met fluorografie of röntgenfoto's. Deze methoden helpen bij het visualiseren van pathologische laesies in longweefsel. Het veroorzaakt echter moeilijkheden bij het onderscheiden van tuberculose van een andere organische pathologie (kwaadaardige en goedaardige neoplasmata, ontstekingsprocessen, parasitaire invasies, professionele longschade).

Om de structuur en de omvang van de pathologische focus te verduidelijken, zijn aanvullende instrumentele onderzoeken nodig:

• gerichte radiografie;
• computertomografie;
• magnetische resonantie beeldvorming.

Methoden voor de diagnose van tuberculose

In het geval van twijfelachtige resultaten en voor de benoeming van adequate therapie, is er behoefte aan nauwkeurigere diagnostische methoden die het mogelijk maken om de pathogeen te isoleren. Microscopisch en bacteriologisch onderzoek van sputum wordt gebruikt om lange tijd longvormen van tuberculose te bevestigen.

In de afgelopen jaren is de incidentie van mycobacterium van verschillende organen en systemen - de nieren, botten, darmen, huid - frequenter geworden. Om deze vormen van tuberculose, echoscopische onderzoeken, urine- en feceskweek te identificeren, kunnen endoscopische onderzoeken worden gebruikt.

PCR-diagnostiek voor tuberculose zal helpen de aanwezigheid van Koch-stengels in het bloed te bevestigen, evenals de gevoeligheid voor bepaalde geneesmiddelen. Dit is een zeer effectieve methode op basis van de detectie van het bacterieel genetisch materiaal in verschillende biologische vloeistoffen.

Specificiteit en indicaties

Polymerase-kettingreactie is een zeer gevoelige microbiologische diagnostische methode, die is gebaseerd op de principes van genetische manipulatie. Om de aanwezigheid van een pathogeen in een biologisch materiaal te bevestigen, is het voldoende om daarvoor een uniek nucleïnezuurfragment te detecteren. PCR voor tuberculose kan bacteriën in het bloed, sputum, urine detecteren.

Op dit moment zijn verschillende analysemethoden ontwikkeld. De meest populaire onder hen zijn de volgende:

• Real-time PCR;
• microfluïdische technologie;
• sequencing en pyrosequencing.

Real-time PCR

Laboratoria gebruiken meestal real-time polymerasekettingreactie, omdat het het aantal foutpositieve resultaten vermindert en het analyseproces zelf een korte tijd kost.

Gezien het grote aantal verborgen vormen van de ziekte en de ineffectiviteit van standaard diagnostische methoden, wordt PCR in toenemende mate gebruikt. Het doel van deze analyse wordt getoond bij:

• verdachte gebieden op de röntgenfoto identificeren;
• twijfelachtige resultaten van tuberculinatie;
• de onmogelijkheid om microscopisch en bacteriologisch onderzoek uit te voeren van sputum bij personen in ernstige toestand;
• het uitvoeren van chirurgische ingrepen wanneer het nodig is om snel te verzekeren dat er geen infectie is;
• de onontvankelijkheid van het gebruik van fluorografie, röntgenfoto's of computertomografie (bijvoorbeeld bij zwangere vrouwen en bij borstvoeding, in geval van overmatige blootstelling aan straling);
• vermoedelijke extrapulmonale tuberculose (aanbevolen wordt niet alleen bloed maar ook slijm te gebruiken).

PCR-diagnostiek van tuberculose heeft zichzelf bewezen bij het onderzoek van kinderen, vanwege het gebrek aan extra blootstelling en snelle resultaten.

Voorbereiding en analyseprocedure

Speciale voorbereiding voor bloed-PCR is niet vereist. Om echter complicaties bij het nemen van bloedmonsters te voorkomen en om materiaal van hoge kwaliteit te verkrijgen, moeten de volgende algemene regels worden gevolgd:

• de analyse dient 's morgens niet eerder te worden gedaan dan 2 uur na het ontwaken;
• Het moet de inname van vet en gefrituurd voedsel een dag vóór het nemen van bloedmonsters beperken;
• afzien van eten, thee en koffie gedurende 8-9 uur, het is toegestaan ​​om schoon water te drinken;
• Rook niet gedurende minstens 3-4 uur.

In het geval van permanente medicatie (hormonen, anticoagulantia, ontstekingsremmers, antibiotica, bloedverdunners), moet u dit aan de laborant melden.

Bij aflevering van sputum moet u uw tanden goed poetsen en uw mond meerdere malen spoelen. Verzamel materiaal in een steriele container. Voor betere resultaten kan 's avonds een slijmoplossend of mucolytisch middel worden ingenomen.

De diagnose zelf bestaat uit verschillende stadia.

Hekmateriaal. Het kan worden uitgevoerd in het laboratorium en op afstand. Sommige soorten materiaal verzamelt de patiënt zelfstandig (urine, slijm).

De vernietiging van de structuur van nucleïnezuren (denaturatie van DNA- en RNA-moleculen). Om dit te doen, wordt het testmateriaal verwarmd tot een temperatuur van 98 graden en gedurende enkele minuten vastgehouden. Dientengevolge worden de dubbele helix afwikkelt, worden enkelstrengs moleculen gevormd.

Joke. Na het toevoegen van een primer (een korte sectie nucleïnezuur), neemt de temperatuur enkele graden af, polymerase wordt geactiveerd.

Elognatsiya. De temperatuur wordt op het optimale niveau gebracht, de enzymactiviteit bereikt een maximum en de tweede keten wordt voltooid volgens de Chargaff-regel van complementariteit.

Om de studie te voltooien, is het noodzakelijk om het vereiste aantal DNA-moleculen te synthetiseren - ongeveer 50 cycli van de bovenstaande reactie. Het duurt ongeveer 2-3 uur. Een positief resultaat van de reactie wijst niet altijd op het actieve stadium van de ziekte, maar is een indicator van de aanwezigheid van een micro-organisme in het lichaam.

Voor- en nadelen van de methode

In vergelijking met andere microbiologische methoden, kost PCR niet veel tijd om Mycobacterium tuberculosis te detecteren met behulp van PCR, het resultaat kan worden verkregen op de dag van testen.

Een ander voordeel is de hoge specificiteit van de analyse, die het mogelijk maakt om de aanwezigheid van de ziekteverwekker te detecteren met een nauwkeurigheid van 90-95% in bijna elk biomateriaal (bloed, urine, uitwerpselen, hersenvocht, sputum, bronchusspoeling).

Er zijn echter verschillende nadelen van de methode:

• een vrij hoog percentage fout-positieve resultaten (tot 15%), wat geassocieerd is met de detectie van niet-levende micro-organismen;
• in sommige gevallen kunt u het feit van de ziekte overslaan, aangezien Mycobacterium tuberculosis vaak wordt onderworpen aan mutaties en het genetisch materiaal verandert;
• lage efficiëntie bij het onderzoek van mensen met immunodeficiëntie;
• hoge kosten van onderzoek, de behoefte aan dure apparatuur en reagentia.

Wat kan worden vervangen?

Gezien de verscheidenheid aan vormen van tuberculose-infectie, voor een meer accurate diagnose en keuze van behandeling, is het noodzakelijk om verschillende diagnostische onderzoeken te combineren:

Verplichte analyse voor kinderen is de Mantoux-test. Als de introductie van tuberculine (genetisch materiaal van mycobacteriën) een uitgesproken reactie is, kan worden aangenomen dat het een infectie met een tuberkelbacillus heeft.

Röntgenmethoden kunnen worden gebruikt om de pathologische focus te visualiseren. Bij de diagnose van extrapulmonale tuberculose worden endoscopische methoden gebruikt bij gelijktijdige biopsie:

• bronchoscopie helpt bij het identificeren van laesies van het strottenhoofd, luchtpijp, bronchiën;
• colonoscopie - darmen;
• cystourethroscopy - organen van het urinestelsel;
• hysteroscopie - vrouwelijke geslachtsorganen. Deze methoden zijn niet specifiek, voor het maken van een nauwkeurige diagnose moet het pathogeen worden geïdentificeerd.

Algemene klinische tests zullen helpen om meer specifiek de toestand van het lichaam te bepalen. Een complete bloedtelling met leukocytenformule is vereist.

Een toename van het aantal neutrofielen met een verlaagd niveau van lymfocyten en een toename van de erythrocytensedimentatiesnelheid (ESR) duidt op een actief ontstekingsproces van bacteriële etiologie. Om schade aan de organen van het urinestelsel uit te sluiten met behulp van een algemene urinalyse en kweek voor steriliteit.

PCR is momenteel beschikbaar in de meeste privélaboratoria. Dit vereist niet alleen hooggekwalificeerde specialisten, maar ook dure apparatuur, een groot aantal reagentia. Daarom is het gebruik van deze methode beperkt, ondanks de hoge nauwkeurigheid en specificiteit.

Polymerase kettingreactie (PCR) voor tuberculose

Tuberculose is een van de gevaarlijkste ziekten waaraan de mensheid al honderden jaren lijdt. Hoewel wetenschappers in staat waren het veroorzakende agens te identificeren en antibiotica te vinden om het te elimineren, is de behandeling niet altijd succesvol. De belangrijkste reden is een lange periode van latente of latente vorm van de ziekte, die meerdere jaren kan duren. Late diagnose vermindert de kans op herstel en een volledige leven van de patiënt aanzienlijk.

Wat is PCR?

Voor de detectie van mycobacterium tuberculosis in het lichaam gedurende meer dan honderd jaar is de Mantoux-test met succes toegepast. Andere methoden hebben zichzelf bewezen: bacteriologische cultuur in kunstmatig medium, uitstrijkmicroscopie, ELISA. Een groot aantal complicaties en fout-positieve resultaten, evenals de duur van sommige methoden, vereiste echter de introductie van nieuwe technologieën in de diagnostische methode. Een enorme doorbraak op het gebied van microbiologie was de opkomst van PCR-analyse voor tuberculose. Sinds enkele decennia toont het zijn effectiviteit en wordt het veel gebruikt voor de differentiële diagnose van verschillende vormen van tuberculose.

PCR-analyse voor tuberculose of polymerasekettingreactie is een methode voor het detecteren van het DNA van bacteriën of hun fragmenten, die is gebaseerd op een toename in nucleïnezuurmoleculen onder de werking van het enzym DNA-polymerase. Voor een positief resultaat is slechts één molecuul van het pathogene DNA voldoende, daarom wordt deze methode als zeer gevoelig beschouwd. De diagnose van OCP bij tuberculose is effectiever dan het uitzaaien van mycobacteriën in een kunstmatige omgeving, omdat het, in tegenstelling tot de kweekmethode, het mogelijk maakt om onderscheid te maken tussen wilde en vaccinstammen die met BCG zijn gevaccineerd. Dit voorkomt valse positieven en maakt de diagnose nauwkeuriger.

Voordelen van PCR

PCR-diagnostiek voor tuberculose maakt het mogelijk om een ​​Koch-bacillus te detecteren in elke biologische omgeving van een organisme met de bepaling van hun kwantitatieve samenstelling, zelfs in het beginstadium van de ziekte, wanneer mycobacteriën in winterslaap zijn. Diagnose van de ziekte in de latente fase maakt het mogelijk om op tijd profylactische behandeling te starten, om de ontwikkeling van foci van ontsteking in de longen en het optreden van complicaties in andere organen en systemen te voorkomen. Bovendien heeft de PCR-test voor tuberculose verschillende voordelen:

• hoge specificiteit - 90-100%;
• hoge snelheid - van 4 uur tot 2 dagen;
• hoge gevoeligheid, vooral bij immunodeficiëntie;
• differentiële diagnose.

Het belangrijkste voordeel van de methode is dat de CRC-diagnose van tuberculose bij kinderen het mogelijk maakt om de gedissemineerde vorm van de ziekte te onderscheiden van het beperkte focale, zelfs met negatieve resultaten van andere tests. Met differentiaal testen kunt u het juiste behandelingsregime kiezen en de effectiviteit van de therapie verhogen.

Hoge specificiteit van de analyse wordt bereikt door kruisreacties met andere nucleïnezuurmoleculen te elimineren, en hoge gevoeligheid maakt het mogelijk om mycobacteriën zelfs in een klein volume van het verzamelde materiaal te detecteren. De PCR-methode van sputum voor tuberculose heeft de grootste betrouwbaarheid, de specificiteit ervan bereikt 100% vergeleken met de studie van andere biologische materialen.

Een speciaal PCR-mechanisme biedt voldoende mogelijkheden voor de detectie van Koch-sticks bij immuungecompromiteerde patiënten. Volgens de analysemethode detecteert de reactie antigenen, dus maakt het niet uit of het lichaam antilichamen tegen het pathogeen produceert of niet. Het is dus mogelijk om extrapulmonale vormen van de ziekte en gevorderde gevallen te diagnosticeren bij patiënten met onnauwkeurigheden in het immuunsysteem, wat niet mogelijk is met andere methoden.

Nadelen van de methode

Ondanks de vele voordelen en hoge gevoeligheid van de test, kan PCR voor tuberculose een vals-negatief resultaat geven. Omdat een zeer kleine hoeveelheid biomateriaal wordt genomen voor de diagnose, is het feit dat de ziekteverwekker "zich verbergt" in een cel of een inflammatoire focus niet uitgesloten en wordt deze niet naar buiten vrijgegeven.

De gevoeligheid van deze methode bij kinderen is 25-80%. In een gerandomiseerde studie bij een groep patiënten met een klinisch bewezen diagnose gaf een PCR-bloedtest voor tuberculose bijvoorbeeld een positief resultaat bij slechts 50% van de patiënten. In dit opzicht is het bij het testen van een kind op pathogene mycobacteriën niet mogelijk om de ene diagnostische methode te vervangen door een andere. Om de afwezigheid van infectie volledig te verifiëren, is het noodzakelijk om op verschillende manieren tegelijk een uitgebreid onderzoek uit te voeren.

Verzamelproces

De belangrijkste voorwaarde voor de betrouwbaarheid van PCR-diagnostiek is naleving van de regels voor het verzamelen van biologische vloeistoffen voor analyse. Verontreinigd of onjuist verzameld materiaal kan onjuiste resultaten veroorzaken. De meest voorkomende zijn de analyse van sputum, bloed en urine, maar voor een diepere differentiële diagnose, kunt u monsters nemen uit de inhoud van de maag, gewrichtsvloeistof, hersenvocht, bronchiale spoelvloeistof, sperma, prostaatsecretie.

Urine PCR voor tuberculose wordt 's morgens na uitwendige genitale hygiëne genomen door in een steriele container te urineren. Tijdens de procedure is het belangrijk om de binnenwanden van de container niet aan te raken om het binnendringen van micro-organismen van derden te voorkomen. Vrouwen die regelmatig seksleven, moeten een tampon in de vagina plaatsen om ontslag door derden te voorkomen.

Een bloedtest wordt 's ochtends op een lege maag afgenomen en PCR van sputum voor tuberculose kan op elk moment van de dag worden uitgevoerd met verplichte voorafgaande mondhygiëne. Dit is nodig om voedselresten die in de container kunnen komen te verwijderen. Bij het opblazen van sputum is het belangrijk om het binnendringen van speeksel en slijm uit de nasopharynx in de container te voorkomen, dit kan de analysegegevens verstoren.

De studie van de maaginhoud gebeurt 's morgens in het ziekenhuis, terwijl het sputum' s nachts doorslikt in de maag. Om mycobacterium tuberculosis te detecteren, maakt deze methode een drievoudige uitzaaiing, wat het waarschijnlijk mogelijk maakt om een ​​Koch-bacillus te isoleren.

Decoderingsresultaten

Kwalitatieve analyse van PCR geeft 2 soorten resultaten "gedetecteerd" of "niet gedetecteerd". Ze duiden respectievelijk een positief en een negatief vonnis aan. Het antwoord "gedetecteerd" betekent dat het DNA van het infectieuze agens in het testmonster aanwezig is en met een waarschijnlijkheid van 97% is het lichaam geïnfecteerd met tuberculose. Een negatief resultaat duidt op de afwezigheid van Koch-sticks-DNA in een steekproef van biologisch materiaal en geeft een kans van 97% dat het lichaam geen groot aantal mycobacteriën heeft en 60% dat de persoon niet is geïnfecteerd.

De grootste specificiteit voor de diagnose van tuberculose heeft een bloedtest en sputum. Met een positief resultaat wijzen ze op een infectie van het lichaam, waarvoor dringend therapeutische maatregelen nodig zijn. Studies van andere biomaterialen kunnen niet het verloop van de ziekte aangeven, maar alleen de aanwezigheid van vreemde bacteriën. Dit gebeurt wanneer een persoon drager is van de ziekte, maar de infectie niet verspreidt in de omgeving en gezonde mensen niet infecteert.

Kwantitatieve PCR-analyse wordt minder vaak uitgevoerd en de behandelende arts behandelt de decodering van zijn resultaten. De onderzoeksindicatoren worden gebruikt om de activiteit van de ziekte en de mate van schade aan het lichaam te bepalen. Op basis van de verkregen gegevens kan een specialist de effectiviteit van de behandeling bepalen en, indien nodig, het therapeutisch schema aanpassen.

Tuberculose is altijd een van de ernstigste problemen voor de gezondheid van de hele mensheid geweest en blijft dit. Moderne diagnostische methoden kunnen de ziekte in een vroeg stadium detecteren om de behandeling op tijd te starten. Tuberculinetest, uitstrijkmicroscopie, bacteriekweek op kunstmatige voedingsmedia hebben zich bewezen op het gebied van laboratoriumdiagnostiek van tuberculose. Het lange wachten op resultaten en de toegenomen frequentie van fout-positieve metingen maakten ze echter overbodig en brachten meer geavanceerde technologieën naar voren. PCR-analyse is een zeer specifieke en zeer effectieve methode voor het diagnosticeren van tuberculose. Zijn resultaten zijn de meest betrouwbare van alle voorgestelde laboratoriummethoden voor het detecteren van Koch-sticks. Het maakt het niet alleen mogelijk om het definitieve vonnis te vellen, maar ook om de noodzakelijke differentiële diagnose te stellen.

Polymerase kettingreactie voor tuberculose

PCR-analyse voor tuberculose maakt het u mogelijk om de ziekte in elk stadium van ontwikkeling te identificeren met een minimum aantal mycobacteriën of zelfs als er fragmenten in het menselijk lichaam zijn door het pathogeen-DNA.

Wat is PCR?

PCR verscheen relatief recent. In 1983 werd de methode ontwikkeld door de Amerikaanse microbioloog Carey Mullis, waarvoor hij de Nobelprijs ontving. De basis van PCR is de herhaalde verdubbeling van een bepaald DNA-gebied met behulp van enzymen in vitro. Dientengevolge, is het pathogeen DNA modieus om zelfs in zijn aanwezigheid in minimale hoeveelheden (sporen van aanwezigheid) te visualiseren. Dit is de gouden standaard van specificiteit.

Tuberculose-PCR (polymeerketenproces) is een diagnostische procedure voor het detecteren van een infectie met behulp van genetische manipulatie. Deze methode van onderzoek wordt gebruikt in microbiologische, virologische en immunologische medische laboratoria in twijfelachtig en praktisch weinig belovend in termen van diagnose gevallen.

Wat is nodig voor analyse?

De analyse vereist 3 componenten:

• DNA-monster.
• Nucleotide verbindingen.
• Polymerase enzym.

De analyse wordt aan het laboratorium voorgelegd zoals voorgeschreven door de behandelende arts.

Wat is de basis van de methode?

Aan het begin van de enquête wordt een microbieel DNA-segment uit de biovloeistof geëxtraheerd.

PCR bepaalt het type pathogeen, 2-3 uur na de test. Het hoeft echter niet te worden geïsoleerd van biologisch materiaal of gedurende een lange periode in het laboratorium te groeien. Het belangrijkste is dat het monster een stuk geïnfecteerd DNA bevatte. Tijdens de analyse van tuberculose wordt in vitro kunstmatige synthese van ribonucleïnezuurinfectie gecreëerd. Vanwege de snelle reactie na een paar uur, kunt u een betrouwbaar resultaat krijgen.

Stadia van diagnose

Tuberculose-PCR is een eenvoudige diagnostische methode waarmee u in korte tijd een antwoord kunt krijgen. Om tbc te bepalen, wordt het biologische materiaal van een geïnfecteerde persoon (bloed, sputum, biologische vloeistof) genomen.

Diagnose vindt plaats in drie hoofdfasen:

• Na bemonstering in het laboratorium wordt de primaire vorm van DNA vernietigd. Bij een temperatuur van 980 graden worden 1,5 kettingen in 1,5 minuut gescheiden.
• In het volgende stadium wordt uitgegloeid, wordt de luchttemperatuur verminderd door een paar divisies, DNA wordt verbonden met de primer.
• De laatste fase van het onderzoek wordt elongatie genoemd. Het is de biosynthese van moleculen.

Om het gewenste DNA met een deeltje van infectie te identificeren, kan de diagnose 20-25 keer worden uitgevoerd.

Is het nodig om PCR te doen voor tuberculose?

PCR-analyse voor tuberculose wordt altijd gedaan wanneer er behoefte aan is, het is opgenomen in de kwaliteitsstandaard voor het testen van een patiënt op tuberculose. Om het uit te voeren, hebt u alleen een verwijzing van uw arts nodig. Meestal worden bij poliklinieken andere diagnostische methoden gebruikt om tuberculose te bepalen.

Deze omvatten:

• Vragen en verzamelen van anamnese.
• Medisch onderzoek.
• Mantoux-tuberculinatie-test.
• Röntgenstraling of fluorografie.
• US.
• Microscopische diagnose van sputumspecimen.

Ondanks het grote aantal diagnostische hulpmiddelen, groeit het aantal geïnfecteerde elk jaar. Bovendien heeft de pathologie enkele kenmerken gekregen: de ernst van het proces, een toename in dodelijke uitkomsten en de immuniteit van de ziekteverwekker voor medicijnen.

Artsen raden af ​​de jaarlijkse inspectie en vaccinatie te staken, omdat dit het risico van besmetting vergroot. PCR-analyse heeft vele voordelen, daarom wordt het beschouwd als de meest accurate en informatieve van alle instrumentele methoden voor het detecteren van tbc en wordt het veel gebruikt in moderne klinieken.

Wat is de waarde van de methode?

Het polymeerketenproces wordt vaak gebruikt in combinatie met aanvullende methoden om tuberculose-infectie te detecteren. De waarde van de methode is als volgt:

• Korte wachttijd. Al na 2-3 uur na bloeddonatie is het mogelijk om de aanwezigheid van een infectie in biologisch materiaal te detecteren. Dit is onmisbaar in gevallen waar sprake is van leven en dood, en u moet de exacte diagnose voor chirurgische interventie identificeren.
• Sommige diagnostische methoden hebben hun eigen contra-indicaties en geven niet altijd een volledig beeld van de diagnose. Met behulp van PCR wordt het pathogeen onmiddellijk gedetecteerd en is het mogelijk om de procedure uit te voeren voor mensen van alle leeftijden.
• Als een monster kunt u elk biologisch materiaal besmet nemen. Om de longvormen van de ziekte te bepalen, wordt urine of speeksel ingenomen. Een bloedmonster helpt om alle vormen van pathologie te identificeren. Ruggenmergvocht is nodig om tuberculeuze meningitis te bepalen.
• Veiligheid methode. Voor onderzoek is alleen het biologische materiaal van de patiënt nodig. Daarom is het een volledig veilige en onschadelijke procedure voor zowel kinderen als volwassenen, in tegenstelling tot fluorografie, die wordt gedaan vanaf de leeftijd van 18, en Mantoux, die negatieve reacties in het lichaam veroorzaakt.
• Zeer gevoelige test. Het maakt het mogelijk om pathologie te identificeren, zelfs in de vroege stadia van ontwikkeling, wanneer het virus nog niet alle cellen van het lichaam heeft getroffen.
• Effectieve methode voor de diagnose van herhaling van pathologie.
• Een innovatieve manier om de Koch-toverstaf te identificeren vanaf de eerste dagen van zijn ontwikkeling. Hiermee kunt u snel beginnen met de juiste behandeling en een persoon van de dood redden. In de vroege stadia van ontwikkeling kan de pathologie volledig worden genezen zonder complicaties.

Deze diagnosemethode heeft veel voordelen en wordt actief gebruikt in verschillende medische instellingen. Ondanks zijn voordelen heeft de PCR echter ook zijn negatieve eigenschappen.

Wat zijn de nadelen?

De nadelen van het proces van de polymeerketen omvatten:

• De hoge kosten van de procedure.
• De methode is niet geschikt voor mensen die al een BCC-behandeling hebben ondergaan, omdat dode infectieuze cellen een vals positief resultaat kunnen geven.
• Wanneer mutatie van cellen van DNA een vals resultaat kan zijn.
• De specialist moet het juiste biologische materiaal nemen om het type infectie en de plaats van lokalisatie te bepalen.
• Niet altijd toegestaan ​​voor patiënten met longziekten.

Wie laat de analyse zien?

Meestal wordt een dergelijke analyse toegewezen:

• • Als de resultaten van de Mantoux twijfelachtige gegevens bevatten, wordt bloed afgenomen van een ader voor tuberculose.
  • De patiënt had contact met een geïnfecteerde persoon, maar een medisch onderzoek heeft niet geholpen de juiste diagnose te stellen.

• Tijdens een noodoperatie, waarin u in de kortste tijd moet weten of de patiënt is geïnfecteerd.
• Tijdens de zwangerschap, wanneer andere diagnostische methoden geen nauwkeurig resultaat kunnen geven zonder de foetus te schaden.

Na het onderzoeken van alle voor- en nadelen van het diagnosticeren van tbc, kunnen we concluderen dat het het beste is om verschillende diagnostische methoden tegelijkertijd te gebruiken voor het maken van een nauwkeurige diagnose. Dit zal helpen ervoor te zorgen dat er een infectie in het lichaam is en in welk stadium van progressie het is. Als de diagnose correct is gedefinieerd, is het mogelijk om snel een conservatieve behandeling te starten en een persoon te redden van de dood.

PCR-diagnose van tuberculose

Tuberculose is een specifieke infectie, de focus ervan kan jarenlang in menselijke weefsels liggen en vervolgens gedurende enkele maanden worden verspreid. Dit is een chronische ziekte waarvan de optimale behandelingsregimes moeilijk te selecteren zijn. Een van de redenen hiervoor is de late diagnose, wanneer mycobacteriën, terwijl ze zich in het menselijk lichaam bevinden, al aan veel medicijnen zijn aangepast.

Welke moderne diagnosemethoden bestaan ​​er? PCR-diagnose - wat is het? Hoe wordt dit onderzoek gedaan? In welke gevallen wordt met deze methode tuberculose gediagnosticeerd en wat is de essentie ervan?

Wat is PCR-diagnostiek

Dit is een van de modernste methoden om niet alleen ziekten te diagnosticeren, maar ook om biologisch materiaal te detecteren. PCR-diagnostiek is relatief recent uitgevonden. Ongeveer 30 jaar geleden, in 1983, stelde een Amerikaanse biochemicus, Carey Banks Mullis, een complex herstelplan voor het biologische materiaal van micro-organismen voor in een kort segment. Dankzij zijn ontdekking kreeg de wetenschapper de hoogste onderscheiding - de Nobelprijs.

Wat is het - PCR-diagnose van infecties? Polymerase-kettingreactie (PCR) is een diagnose van de detectie van virale ziekten, gebaseerd op werkwijzen van genetische manipulatie. Het wordt veel gebruikt in de medische microbiologie, immunologie en virologie. De methode is universeel en helpt om een ​​diagnose te stellen met een kleine hoeveelheid materiaal. Een infectie kan letterlijk worden gedetecteerd in de eerste uren van infectie ermee, lang voordat de eerste symptomen van de ziekte verschijnen.

De methode bestaat erin om uit het materiaal van een zieke persoon niet de ziekteverwekker zelf te halen, maar fragmenten van het genoom (DNA-deeltjes), de biosynthese ervan met daaropvolgende bepaling tot welke klasse van micro-organismen het verkregen genetische materiaal behoort door middel van moleculair genetische methoden.

Ondanks het feit dat dit een complex proces is, kost het veel minder tijd dan veel biologische methoden voor het detecteren van infectieuze agentia. Binnen slechts een paar uur kan een micro-organisme worden gedetecteerd met behulp van PCR. Om dit te doen, is het niet nodig om het te isoleren van de omgeving (bloed, hersenvocht, sputum) en het te laten groeien op kunstmatige voedingsmedia. Het is voldoende dat een klein fragment van de DNA-streng van het infectieuze agens aanwezig is in het materiaal dat wordt bestudeerd.

De basis van de reactie is de mogelijkheid onder kunstmatige omstandigheden (in vitro) om de synthese van nucleïnezuurmoleculen van het infectieuze agens te creëren.

Wat is nodig voor PCR?

1. Primers zijn de DNA-segmenten waaruit biosynthese of creatie begint.
2. Nucleotiden of complexe verbindingen die de basis vormen van een DNA- of RNA-molecuul.
3. Polymerase kettingreactie is onmogelijk zonder de aanwezigheid van polymerase, wat een enzym is dat de PCR versnelt.

Stadia van PCR-diagnostiek

Hoe wordt moleculaire diagnose uitgevoerd door PCR? De procedure is eenvoudig en neemt een korte tijd in beslag, rekening houdend met de verzameling van materiaal.

1. Voordat ze met het onderzoek beginnen, nemen ze het nodige biologische materiaal in - dit is het bronchiale waswater, bloed, maaginhoud, sputum. Het type biologisch materiaal hangt af van het vermoedelijke pathogeen.
2. Denaturatie of vernietiging van de primaire structuur van DNA, dat uit twee ketens bestaat. De essentie van deze fase is om de twee ketens te scheiden onder invloed van hoge temperaturen (het maximum is 98 ºC, dat niet langer duurt dan twee minuten).
3. In het volgende stadium van PCR, genaamd uitgloeien, wordt de temperatuur met verschillende graden verlaagd, zodat de primer aan de DNA-streng zal binden.
4. Verlenging, waarbij de synthese van de gewenste moleculen direct plaatsvindt.

Als resultaat ontvangen slechts 25-30 van dergelijke cycli het noodzakelijke aantal kopieën van het DNA van het micro-organisme, die gemakkelijk te herkennen zijn.

Vereist PCR een diagnose van tuberculose?

Het is niet mogelijk voor absoluut alle mensen met vermoedelijke tuberculose om PCR uit te voeren, omdat de methode dure apparatuur vereist. Niet alle openbare klinieken kunnen het zich veroorloven om het te kopen. Bovendien was het zo dat de gebruikelijke methoden om een ​​infectie te diagnosticeren in de meeste gevallen ook zichzelf rechtvaardigen.

Deze omvatten:

• patiëntonderzoek, geschiedenis nemen;
• volledig onderzoek van de persoon;
• een studie met de tuberculinetest van Mantoux;
• radiografie of fluorografie;
• computer diagnostiek indien nodig;
• microbiologische onderzoeksmethoden: uitstrijk microscopie en sputum bacteriologisch onderzoek.

PCR voor tuberculose wordt in speciale gevallen uitgevoerd wanneer het moeilijk is om een ​​diagnose te stellen of het niet mogelijk is om andere instrumentele methoden uit te voeren.

Ondanks de overvloed aan diagnostische methoden, blijft de incidentie van tuberculose toenemen. Momenteel is er niet alleen de groei, maar ook andere kenmerken:

• de ziekte komt vaak in ernstige vorm voor;
• het aantal dodelijke gevallen neemt toe;
• steeds resistenter tegen moderne chemotherapie zijn gediagnostiseerde vormen van de ziekte.

De terughoudendheid van de mensen zelf om jaarlijks routine-medische onderzoeken te ondergaan, de afwijzing van vaccinatie leidt tot de verspreiding van tuberculose. In dergelijke omstandigheden hebben we snelle, informatieve en effectieve onderzoeksmethoden nodig die toegankelijk moeten zijn voor kinderen en volwassenen. Alle bovenstaande diagnostische methoden zijn veel slechter dan PCR.

Voordelen van het diagnosticeren van tuberculose met PCR

Dit onderzoek, hoewel nieuw, heeft zichzelf goed bewezen, vooral in controversiële gevallen waarin het onmogelijk is om een ​​diagnose te stellen om een ​​aantal redenen.

Dankzij PCR is het veel gemakkelijker om de veroorzaker van tuberculose in het testmateriaal te detecteren.

De voordelen van PCR-diagnose zijn als volgt.

1. Dit is een snelle analyse. Een klein fragment van het DNA-molecuul kan worden gebruikt om binnen enkele uren (ongeveer vijf) een diagnose te stellen, die met succes wordt gebruikt in noodsituaties, wanneer bijvoorbeeld vóór een operatie moet worden vastgesteld of iemand ziek is van tuberculose.
2. PCR-analyse is toegestaan ​​in het geval dat andere methoden niet beschikbaar of verboden zijn (voor de detectie van longtuberculose, moet u soms meerdere radiografische beelden maken, wat een grote dosis straling zal zijn).
3. Met behulp van PCR wordt elke biologische omgeving onderzocht op de aanwezigheid van een pathogeen daarin. U kunt bijvoorbeeld een studie van hersenvocht uitvoeren, als er een vermoeden bestaat van tuberculeuze meningitis.
4. Toegestane PCR-diagnose van infectieziekten bij kinderen, omdat de methode veilig is.
5. Hiermee kunt u de ziekteverwekker in elk stadium van de ziekte identificeren.
6. De hoge gevoeligheid van PCR maakt het mogelijk om Mycobacterium tuberculosis te detecteren, zelfs als er slechts een paar micro-organismen in het biologische materiaal aanwezig zijn.
7. Het is goed om uit te voeren voor de diagnose van ziekte-recidief.

Immers de lees-PCR lijkt een bijna perfecte diagnostische methode, die iedereen met verdenking van tuberculose zou moeten maken. Maar er zijn ook nadelen, ze moeten in aanmerking worden genomen.

Nadelen van PCR bij de diagnose van tuberculose

In onze tijd zijn dergelijke diagnoses zeldzamer dan regelmaat. En daarvoor is er reden.

1. Dit is een dure onderzoeksmethode. In veel klinieken is apparatuur voor PCR afwezig vanwege de hoge kosten, maar analyse kan nog steeds worden uitgevoerd in betaalde laboratoria.
2. Direct na de behandeling kunnen dode mycobacteriën of in kleine hoeveelheden leven nog aanwezig zijn in het menselijk lichaam (het resultaat zal positief zijn tijdens PCR-diagnostiek), dus de methode zal op dit moment onbetrouwbaar zijn, het heeft geen zin om het uit te voeren.
3. Mutaties van mycobacteriën resulteren in niet-effectieve PCR - een normale DNA-strengsequentie kan niet worden gesynthetiseerd.
4. Het is noodzakelijk om de juiste omgeving voor de studie te kiezen, bloed wordt alleen ingenomen als het wordt vermoed besmet te zijn (sepsis), het is niet nodig om sputum te nemen als er sprake is van tuberculose van de organen van het zenuwstelsel. In dit geval kan de PCR het pathogeen niet detecteren en is de diagnose niet informatief.

Indicaties voor het detecteren van tuberculose met behulp van PCR-analyse

PCR-diagnose van tuberculose wordt het vaakst uitgevoerd in controversiële gevallen. Wanneer verwijzen artsen naar deze studie?

1. Als het moeilijk is om een ​​diagnose te stellen met behulp van de gebruikelijke beschikbare methoden, maar er was contact met een patiënt met tuberculose.
2. In het geval dat een persoon niet aan een kliniek kan worden afgeleverd om routinematige routinetests voor tuberculose te ondergaan, is het gemakkelijker om hem met PCR te onderzoeken, omdat het sputum voor de test in een pot kan worden afgeleverd en de diagnose binnen een paar uur wordt bevestigd.
3. Als een persoon een spoedoperatie gaat krijgen en het is dringend nodig om uit te zoeken of hij ziek is van tuberculose.
4. Indien nodig, is een zwangere vrouw ook beter om te onderzoeken op tuberculose met behulp van PCR, omdat de methode veilig is.
5. Op betaalde basis is iedereen die niet is gediagnosticeerd met tuberculose bevestigd met bacteriologische methoden en fluoroscopie. Dit gebeurt wanneer de laesie in de longen onmerkbaar is in het directe beeld en de persoon tijdens de bevalling van sputum voor het onderzoek de aanbevelingen voor de juiste verzameling van materiaal niet kon volgen. In dit geval maakt de persoon zich zorgen over alle symptomen die kenmerkend zijn voor longtuberculose.
6. Als er twijfels zijn over de resultaten van de Mantoux-test.
7. Het verdient de voorkeur een PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen te doen. De procedure is veilig, creëert geen extra blootstelling aan straling en is effectief bij het opsporen van moeilijk te diagnosticeren vormen van de ziekte.

Tijdige diagnose van tuberculose is de sleutel tot een goed voorgeschreven behandeling en het verminderen van de verspreiding van de ziekte. Vaak zijn bekende ziektedetectiemethoden niet altijd effectief. Daarom is PCR vandaag de dag een van de meest betrouwbare en veilige manieren om infectie te detecteren in de vroege stadia van zijn ontwikkeling.