Polymerase kettingreactie (PCR) voor tuberculose

Tuberculose is een van de gevaarlijkste ziekten waaraan de mensheid al honderden jaren lijdt. Hoewel wetenschappers in staat waren het veroorzakende agens te identificeren en antibiotica te vinden om het te elimineren, is de behandeling niet altijd succesvol. De belangrijkste reden is een lange periode van latente of latente vorm van de ziekte, die meerdere jaren kan duren. Late diagnose vermindert de kans op herstel en een volledige leven van de patiënt aanzienlijk.

Wat is PCR?

Voor de detectie van mycobacterium tuberculosis in het lichaam gedurende meer dan honderd jaar is de Mantoux-test met succes toegepast. Andere methoden hebben zichzelf bewezen: bacteriologische cultuur in kunstmatig medium, uitstrijkmicroscopie, ELISA. Een groot aantal complicaties en fout-positieve resultaten, evenals de duur van sommige methoden, vereiste echter de introductie van nieuwe technologieën in de diagnostische methode. Een enorme doorbraak op het gebied van microbiologie was de opkomst van PCR-analyse voor tuberculose. Sinds enkele decennia toont het zijn effectiviteit en wordt het veel gebruikt voor de differentiële diagnose van verschillende vormen van tuberculose.

PCR-analyse voor tuberculose of polymerasekettingreactie is een methode voor het detecteren van het DNA van bacteriën of hun fragmenten, die is gebaseerd op een toename in nucleïnezuurmoleculen onder de werking van het enzym DNA-polymerase. Voor een positief resultaat is slechts één molecuul van het pathogene DNA voldoende, daarom wordt deze methode als zeer gevoelig beschouwd. De diagnose van OCP bij tuberculose is effectiever dan het uitzaaien van mycobacteriën in een kunstmatige omgeving, omdat het, in tegenstelling tot de kweekmethode, het mogelijk maakt om onderscheid te maken tussen wilde en vaccinstammen die met BCG zijn gevaccineerd. Dit voorkomt valse positieven en maakt de diagnose nauwkeuriger.

Voordelen van PCR

PCR-diagnostiek voor tuberculose maakt het mogelijk om een ​​Koch-bacillus te detecteren in elke biologische omgeving van een organisme met de bepaling van hun kwantitatieve samenstelling, zelfs in het beginstadium van de ziekte, wanneer mycobacteriën in winterslaap zijn. Diagnose van de ziekte in de latente fase maakt het mogelijk om op tijd profylactische behandeling te starten, om de ontwikkeling van foci van ontsteking in de longen en het optreden van complicaties in andere organen en systemen te voorkomen. Bovendien heeft de PCR-test voor tuberculose verschillende voordelen:

• hoge specificiteit - 90-100%;
• hoge snelheid - van 4 uur tot 2 dagen;
• hoge gevoeligheid, vooral bij immunodeficiëntie;
• differentiële diagnose.

Het belangrijkste voordeel van de methode is dat de CRC-diagnose van tuberculose bij kinderen het mogelijk maakt om de gedissemineerde vorm van de ziekte te onderscheiden van het beperkte focale, zelfs met negatieve resultaten van andere tests. Met differentiaal testen kunt u het juiste behandelingsregime kiezen en de effectiviteit van de therapie verhogen.

Hoge specificiteit van de analyse wordt bereikt door kruisreacties met andere nucleïnezuurmoleculen te elimineren, en hoge gevoeligheid maakt het mogelijk om mycobacteriën zelfs in een klein volume van het verzamelde materiaal te detecteren. De PCR-methode van sputum voor tuberculose heeft de grootste betrouwbaarheid, de specificiteit ervan bereikt 100% vergeleken met de studie van andere biologische materialen.

Een speciaal PCR-mechanisme biedt voldoende mogelijkheden voor de detectie van Koch-sticks bij immuungecompromiteerde patiënten. Volgens de analysemethode detecteert de reactie antigenen, dus maakt het niet uit of het lichaam antilichamen tegen het pathogeen produceert of niet. Het is dus mogelijk om extrapulmonale vormen van de ziekte en gevorderde gevallen te diagnosticeren bij patiënten met onnauwkeurigheden in het immuunsysteem, wat niet mogelijk is met andere methoden.

Nadelen van de methode

Ondanks de vele voordelen en hoge gevoeligheid van de test, kan PCR voor tuberculose een vals-negatief resultaat geven. Omdat een zeer kleine hoeveelheid biomateriaal wordt genomen voor de diagnose, is het feit dat de ziekteverwekker "zich verbergt" in een cel of een inflammatoire focus niet uitgesloten en wordt deze niet naar buiten vrijgegeven.

De gevoeligheid van deze methode bij kinderen is 25-80%. In een gerandomiseerde studie bij een groep patiënten met een klinisch bewezen diagnose gaf een PCR-bloedtest voor tuberculose bijvoorbeeld een positief resultaat bij slechts 50% van de patiënten. In dit opzicht is het bij het testen van een kind op pathogene mycobacteriën niet mogelijk om de ene diagnostische methode te vervangen door een andere. Om de afwezigheid van infectie volledig te verifiëren, is het noodzakelijk om op verschillende manieren tegelijk een uitgebreid onderzoek uit te voeren.

Verzamelproces

De belangrijkste voorwaarde voor de betrouwbaarheid van PCR-diagnostiek is naleving van de regels voor het verzamelen van biologische vloeistoffen voor analyse. Verontreinigd of onjuist verzameld materiaal kan onjuiste resultaten veroorzaken. De meest voorkomende zijn de analyse van sputum, bloed en urine, maar voor een diepere differentiële diagnose, kunt u monsters nemen uit de inhoud van de maag, gewrichtsvloeistof, hersenvocht, bronchiale spoelvloeistof, sperma, prostaatsecretie.

Urine PCR voor tuberculose wordt 's morgens na uitwendige genitale hygiëne genomen door in een steriele container te urineren. Tijdens de procedure is het belangrijk om de binnenwanden van de container niet aan te raken om het binnendringen van micro-organismen van derden te voorkomen. Vrouwen die regelmatig seksleven, moeten een tampon in de vagina plaatsen om ontslag door derden te voorkomen.

Een bloedtest wordt 's ochtends op een lege maag afgenomen en PCR van sputum voor tuberculose kan op elk moment van de dag worden uitgevoerd met verplichte voorafgaande mondhygiëne. Dit is nodig om voedselresten die in de container kunnen komen te verwijderen. Bij het opblazen van sputum is het belangrijk om het binnendringen van speeksel en slijm uit de nasopharynx in de container te voorkomen, dit kan de analysegegevens verstoren.

De studie van de maaginhoud gebeurt 's morgens in het ziekenhuis, terwijl het sputum' s nachts doorslikt in de maag. Om mycobacterium tuberculosis te detecteren, maakt deze methode een drievoudige uitzaaiing, wat het waarschijnlijk mogelijk maakt om een ​​Koch-bacillus te isoleren.

Decoderingsresultaten

Kwalitatieve analyse van PCR geeft 2 soorten resultaten "gedetecteerd" of "niet gedetecteerd". Ze duiden respectievelijk een positief en een negatief vonnis aan. Het antwoord "gedetecteerd" betekent dat het DNA van het infectieuze agens in het testmonster aanwezig is en met een waarschijnlijkheid van 97% is het lichaam geïnfecteerd met tuberculose. Een negatief resultaat duidt op de afwezigheid van Koch-sticks-DNA in een steekproef van biologisch materiaal en geeft een kans van 97% dat het lichaam geen groot aantal mycobacteriën heeft en 60% dat de persoon niet is geïnfecteerd.

De grootste specificiteit voor de diagnose van tuberculose heeft een bloedtest en sputum. Met een positief resultaat wijzen ze op een infectie van het lichaam, waarvoor dringend therapeutische maatregelen nodig zijn. Studies van andere biomaterialen kunnen niet het verloop van de ziekte aangeven, maar alleen de aanwezigheid van vreemde bacteriën. Dit gebeurt wanneer een persoon drager is van de ziekte, maar de infectie niet verspreidt in de omgeving en gezonde mensen niet infecteert.

Kwantitatieve PCR-analyse wordt minder vaak uitgevoerd en de behandelende arts behandelt de decodering van zijn resultaten. De onderzoeksindicatoren worden gebruikt om de activiteit van de ziekte en de mate van schade aan het lichaam te bepalen. Op basis van de verkregen gegevens kan een specialist de effectiviteit van de behandeling bepalen en, indien nodig, het therapeutisch schema aanpassen.

Tuberculose is altijd een van de ernstigste problemen voor de gezondheid van de hele mensheid geweest en blijft dit. Moderne diagnostische methoden kunnen de ziekte in een vroeg stadium detecteren om de behandeling op tijd te starten. Tuberculinetest, uitstrijkmicroscopie, bacteriekweek op kunstmatige voedingsmedia hebben zich bewezen op het gebied van laboratoriumdiagnostiek van tuberculose. Het lange wachten op resultaten en de toegenomen frequentie van fout-positieve metingen maakten ze echter overbodig en brachten meer geavanceerde technologieën naar voren. PCR-analyse is een zeer specifieke en zeer effectieve methode voor het diagnosticeren van tuberculose. Zijn resultaten zijn de meest betrouwbare van alle voorgestelde laboratoriummethoden voor het detecteren van Koch-sticks. Het maakt het niet alleen mogelijk om het definitieve vonnis te vellen, maar ook om de noodzakelijke differentiële diagnose te stellen.

PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen en volwassenen: aanwijzingen voor

De Wereldgezondheidsorganisatie erkende 20 jaar geleden dat de verspreiding van tuberculose uit de hand gelopen was en de omvang van een epidemie bereikte. Sindsdien is de situatie niet verbeterd. Jaarlijks worden meer dan een miljoen gevallen van de ziekte gediagnosticeerd, waarvan bijna een kwart dodelijk is. In het laatste decennium is de incidentie van kinderen toegenomen, de meeste vormen van de ziekte lenen zich niet voor standaard antibiotische therapie.

Tegenwoordig is een van de wereldwijde taken voor de geneeskunde de ontwikkeling van dergelijke diagnostische methoden die het mogelijk maken om pathologie te identificeren vóór het begin van uitgesproken klinische symptomen. Een daarvan is de polymerasekettingreactie (PCR) voor tuberculose, die helpt om Koch-ziekteverwekkende sticks in bloed, sputum en andere biologische vloeistoffen te detecteren.

Diagnose van tuberculose

Screeningtests zijn gericht op het detecteren van patiënten, dragers van tuberculose en het voorkomen van de verspreiding van infecties in de samenleving. Voor kinderen onder de 14 jaar wordt de Mantoux-test massaal gebruikt. Dit is een immunologische test waarbij een dosis tuberculine subcutaan wordt geïnjecteerd - een complex mengsel van het genetisch materiaal van verschillende soorten mycobacteriën. Het verschijnen van een uitgesproken reactie duidt op een actief voorkomend infectieus proces.

Voor preventief onderzoek bij volwassenen met fluorografie of röntgenfoto's. Deze methoden helpen bij het visualiseren van pathologische laesies in longweefsel. Het veroorzaakt echter moeilijkheden bij het onderscheiden van tuberculose van een andere organische pathologie (kwaadaardige en goedaardige neoplasmata, ontstekingsprocessen, parasitaire invasies, professionele longschade).

Om de structuur en de omvang van de pathologische focus te verduidelijken, zijn aanvullende instrumentele onderzoeken nodig:

• gerichte radiografie;
• computertomografie;
• magnetische resonantie beeldvorming.

Methoden voor de diagnose van tuberculose

In het geval van twijfelachtige resultaten en voor de benoeming van adequate therapie, is er behoefte aan nauwkeurigere diagnostische methoden die het mogelijk maken om de pathogeen te isoleren. Microscopisch en bacteriologisch onderzoek van sputum wordt gebruikt om lange tijd longvormen van tuberculose te bevestigen.

In de afgelopen jaren is de incidentie van mycobacterium van verschillende organen en systemen - de nieren, botten, darmen, huid - frequenter geworden. Om deze vormen van tuberculose, echoscopische onderzoeken, urine- en feceskweek te identificeren, kunnen endoscopische onderzoeken worden gebruikt.

PCR-diagnostiek voor tuberculose zal helpen de aanwezigheid van Koch-stengels in het bloed te bevestigen, evenals de gevoeligheid voor bepaalde geneesmiddelen. Dit is een zeer effectieve methode op basis van de detectie van het bacterieel genetisch materiaal in verschillende biologische vloeistoffen.

Specificiteit en indicaties

Polymerase-kettingreactie is een zeer gevoelige microbiologische diagnostische methode, die is gebaseerd op de principes van genetische manipulatie. Om de aanwezigheid van een pathogeen in een biologisch materiaal te bevestigen, is het voldoende om daarvoor een uniek nucleïnezuurfragment te detecteren. PCR voor tuberculose kan bacteriën in het bloed, sputum, urine detecteren.

Op dit moment zijn verschillende analysemethoden ontwikkeld. De meest populaire onder hen zijn de volgende:

• Real-time PCR;
• microfluïdische technologie;
• sequencing en pyrosequencing.

Real-time PCR

Laboratoria gebruiken meestal real-time polymerasekettingreactie, omdat het het aantal foutpositieve resultaten vermindert en het analyseproces zelf een korte tijd kost.

Gezien het grote aantal verborgen vormen van de ziekte en de ineffectiviteit van standaard diagnostische methoden, wordt PCR in toenemende mate gebruikt. Het doel van deze analyse wordt getoond bij:

• verdachte gebieden op de röntgenfoto identificeren;
• twijfelachtige resultaten van tuberculinatie;
• de onmogelijkheid om microscopisch en bacteriologisch onderzoek uit te voeren van sputum bij personen in ernstige toestand;
• het uitvoeren van chirurgische ingrepen wanneer het nodig is om snel te verzekeren dat er geen infectie is;
• de onontvankelijkheid van het gebruik van fluorografie, röntgenfoto's of computertomografie (bijvoorbeeld bij zwangere vrouwen en bij borstvoeding, in geval van overmatige blootstelling aan straling);
• vermoedelijke extrapulmonale tuberculose (aanbevolen wordt niet alleen bloed maar ook slijm te gebruiken).

PCR-diagnostiek van tuberculose heeft zichzelf bewezen bij het onderzoek van kinderen, vanwege het gebrek aan extra blootstelling en snelle resultaten.

Voorbereiding en analyseprocedure

Speciale voorbereiding voor bloed-PCR is niet vereist. Om echter complicaties bij het nemen van bloedmonsters te voorkomen en om materiaal van hoge kwaliteit te verkrijgen, moeten de volgende algemene regels worden gevolgd:

• de analyse dient 's morgens niet eerder te worden gedaan dan 2 uur na het ontwaken;
• Het moet de inname van vet en gefrituurd voedsel een dag vóór het nemen van bloedmonsters beperken;
• afzien van eten, thee en koffie gedurende 8-9 uur, het is toegestaan ​​om schoon water te drinken;
• Rook niet gedurende minstens 3-4 uur.

In het geval van permanente medicatie (hormonen, anticoagulantia, ontstekingsremmers, antibiotica, bloedverdunners), moet u dit aan de laborant melden.

Bij aflevering van sputum moet u uw tanden goed poetsen en uw mond meerdere malen spoelen. Verzamel materiaal in een steriele container. Voor betere resultaten kan 's avonds een slijmoplossend of mucolytisch middel worden ingenomen.

De diagnose zelf bestaat uit verschillende stadia.

Hekmateriaal. Het kan worden uitgevoerd in het laboratorium en op afstand. Sommige soorten materiaal verzamelt de patiënt zelfstandig (urine, slijm).

De vernietiging van de structuur van nucleïnezuren (denaturatie van DNA- en RNA-moleculen). Om dit te doen, wordt het testmateriaal verwarmd tot een temperatuur van 98 graden en gedurende enkele minuten vastgehouden. Dientengevolge worden de dubbele helix afwikkelt, worden enkelstrengs moleculen gevormd.

Joke. Na het toevoegen van een primer (een korte sectie nucleïnezuur), neemt de temperatuur enkele graden af, polymerase wordt geactiveerd.

Elognatsiya. De temperatuur wordt op het optimale niveau gebracht, de enzymactiviteit bereikt een maximum en de tweede keten wordt voltooid volgens de Chargaff-regel van complementariteit.

Om de studie te voltooien, is het noodzakelijk om het vereiste aantal DNA-moleculen te synthetiseren - ongeveer 50 cycli van de bovenstaande reactie. Het duurt ongeveer 2-3 uur. Een positief resultaat van de reactie wijst niet altijd op het actieve stadium van de ziekte, maar is een indicator van de aanwezigheid van een micro-organisme in het lichaam.

Voor- en nadelen van de methode

In vergelijking met andere microbiologische methoden, kost PCR niet veel tijd om Mycobacterium tuberculosis te detecteren met behulp van PCR, het resultaat kan worden verkregen op de dag van testen.

Een ander voordeel is de hoge specificiteit van de analyse, die het mogelijk maakt om de aanwezigheid van de ziekteverwekker te detecteren met een nauwkeurigheid van 90-95% in bijna elk biomateriaal (bloed, urine, uitwerpselen, hersenvocht, sputum, bronchusspoeling).

Er zijn echter verschillende nadelen van de methode:

• een vrij hoog percentage fout-positieve resultaten (tot 15%), wat geassocieerd is met de detectie van niet-levende micro-organismen;
• in sommige gevallen kunt u het feit van de ziekte overslaan, aangezien Mycobacterium tuberculosis vaak wordt onderworpen aan mutaties en het genetisch materiaal verandert;
• lage efficiëntie bij het onderzoek van mensen met immunodeficiëntie;
• hoge kosten van onderzoek, de behoefte aan dure apparatuur en reagentia.

Wat kan worden vervangen?

Gezien de verscheidenheid aan vormen van tuberculose-infectie, voor een meer accurate diagnose en keuze van behandeling, is het noodzakelijk om verschillende diagnostische onderzoeken te combineren:

Verplichte analyse voor kinderen is de Mantoux-test. Als de introductie van tuberculine (genetisch materiaal van mycobacteriën) een uitgesproken reactie is, kan worden aangenomen dat het een infectie met een tuberkelbacillus heeft.

Röntgenmethoden kunnen worden gebruikt om de pathologische focus te visualiseren. Bij de diagnose van extrapulmonale tuberculose worden endoscopische methoden gebruikt bij gelijktijdige biopsie:

• bronchoscopie helpt bij het identificeren van laesies van het strottenhoofd, luchtpijp, bronchiën;
• colonoscopie - darmen;
• cystourethroscopy - organen van het urinestelsel;
• hysteroscopie - vrouwelijke geslachtsorganen. Deze methoden zijn niet specifiek, voor het maken van een nauwkeurige diagnose moet het pathogeen worden geïdentificeerd.

Algemene klinische tests zullen helpen om meer specifiek de toestand van het lichaam te bepalen. Een complete bloedtelling met leukocytenformule is vereist.

Een toename van het aantal neutrofielen met een verlaagd niveau van lymfocyten en een toename van de erythrocytensedimentatiesnelheid (ESR) duidt op een actief ontstekingsproces van bacteriële etiologie. Om schade aan de organen van het urinestelsel uit te sluiten met behulp van een algemene urinalyse en kweek voor steriliteit.

PCR is momenteel beschikbaar in de meeste privélaboratoria. Dit vereist niet alleen hooggekwalificeerde specialisten, maar ook dure apparatuur, een groot aantal reagentia. Daarom is het gebruik van deze methode beperkt, ondanks de hoge nauwkeurigheid en specificiteit.

PCR-analyse voor de diagnose van tuberculose

De geneeskunde staat nooit stil en tot op heden maken de ontwikkelingen in de gezondheidssector het mogelijk vele voorheen niet-aangetaste aandoeningen te diagnosticeren en te genezen. Er zijn ook ziekten die niet kunnen worden opgespoord door visuele inspectie. Tuberculose is er altijd al geweest. Het is een gevaarlijke besmettelijke ziekte die de longen, gewrichten en botten aantast, en leidt vaak zelfs in onze dagen tot de dood. De diagnostische methoden voor deze ziekte zijn verbeterd, wat het mogelijk maakt om de ziekte te detecteren in eerdere stadia wanneer het behandelbaar is. Onder hen zijn niet alleen röntgen- en Mantoux-tests, maar ook PCR voor tuberculose.

Tuberculose - wat is het

Eerder werd tuberculose een droge ziekte of phthisis genoemd. Dit is een bacteriële infectie die meestal de longen aantast. De extrapulmonale vormen - tuberculose van botten en gewrichten, tuberculaire meningitis - zijn minder vaak voorkomende en meer gevorderde stadia. De veroorzaker van deze infectieziekte zijn mycobacteriën. Tuberculosebacillus wordt ook wel Koch's toverstokje genoemd.

TB-infectie is zeer besmettelijk, het wordt overgedragen door druppeltjes in de lucht bij het hoesten en niezen van de patiënt. De enige bescherming tegen deze kwaal is het tijdig afgeleverde vaccin. Het beschermt niet tegen infectie, maar laat geen bacillen toe om het lichaam binnen te komen om tuberculose te veroorzaken.

Vormen van tuberculose

De ziekte kan zowel in open als in gesloten vorm voorkomen. De verschillen zijn als volgt:

• gesloten tuberculose is asymptomatisch. In dergelijke omstandigheden is het Koch-staafje in het sputum onmogelijk te detecteren, daarom is het geïnfecteerde niet gevaarlijk voor het milieu. Een dergelijk verloop van de ziekte bedreigt meestal niet de meest geïnfecteerde, maar er zijn uitzonderingen - in één geval van tien is gesloten tuberculose in staat om in een open vorm te gaan;
• met een open vorm worden de mycobacteriën die tuberculose veroorzaken gevonden in speeksel en sputum van de patiënt. Een besmet organisme vormt een groot gevaar voor de samenleving, zelfs als het geïsoleerd is. In de regel heeft de ziekte eerst invloed op de longen. Als het niet vroeg wordt gediagnosticeerd, kan het andere vormen aannemen, zoals tuberculose van de botten of gewrichten.

De open vorm van tuberculose wordt op verschillende manieren gediagnosticeerd. De patiënt ondergaat een thoraxfoto of röntgenfoto van de borst, analyseert zijn biologisch materiaal of de huidtest van Mantoux. Onlangs is een andere methode naar voren gekomen die als even effectief wordt beschouwd - de analyse van de polymerasekettingreactie (PCR).

Wat betekent PCR

In de medische praktijk worden al lang methoden gebruikt voor het diagnosticeren van deze of gene ziekte door het DNA of RNA in het menselijk lichaam te detecteren. Dit is precies de PCR voor tuberculose. Dit is een zeer nauwkeurige analyse van bloed of andere biologische vloeistof, waarmee u bacteriën kunt identificeren met een minimum van hun concentratie in het geselecteerde materiaal, een enkele cel is voldoende. De studie wordt uitgevoerd met behulp van een speciaal polymerase-enzym.

Voordelen van de methode

PCR is een diagnostische methode die zichzelf heeft bewezen aan de beste kant, dus het wordt vrij vaak gebruikt, zowel in combinatie met andere methoden als onafhankelijk. De voordelen:

• de kortste productievoorwaarden. De studie wordt snel uitgevoerd, in ongeveer 5 uur kan PCR de aanwezigheid van tuberculosebacil in de biologische vloeistof van de patiënt detecteren. Dit geldt met name als u onmiddellijk chirurgisch moet ingrijpen en daarvoor een nauwkeurige diagnose moet krijgen;
• Het gebeurt dat andere diagnostische methoden gecontraïndiceerd zijn voor de patiënt. Röntgenstralen kunnen bijvoorbeeld lang niet iedereen doen. Bovendien is het beeld niet altijd mogelijk om een ​​diagnose te stellen, vooral als de ziekte zich in een vroeg stadium bevindt. Met behulp van de PCR-methode wordt het pathogeen onmiddellijk gedetecteerd;
• De biologische vloeistof van elke patiënt is geschikt voor analyse. PCR van urine en speeksel voor tuberculose wordt uitgevoerd om pulmonaire en extrapulmonale vormen te identificeren. Het onderzoek wordt ook uitgevoerd met behulp van de spinale vloeistof van de patiënt om tuberculeuze meningitis te detecteren.
• De methode is absoluut veilig. Om het uit te voeren, volstaat het om een ​​biologische vloeistof van de patiënt te verkrijgen. PCR-diagnostiek van tuberculose bij kinderen is gemakkelijk en onschadelijk, aangezien röntgenonderzoek alleen is toegestaan ​​vanaf 18 jaar en de Mantoux-test soms bijwerkingen veroorzaakt;
• PCR is een zeer gevoelige analyse. Hiermee kunt u Koch-sticks identificeren met een minimale concentratie van mycobacteriën;
• Met de hulp van een speciaal polymerase-enzym wordt een aandoening in elk stadium gediagnosticeerd, van vroeg tot gevorderd;
• deze methode is effectief bij het diagnosticeren van herhaling van de ziekte;
• Deze methode is een doorbraak in het maken van nauwkeurige diagnoses in de vroege stadia van de ziekte. Hiermee kunt u in de kortst mogelijke tijd met de behandeling beginnen en ziekteverwekkers vernietigen, terwijl ze nog geen onomkeerbare negatieve impact hebben gehad op de organen en systemen van het menselijk lichaam.

Waar PCR-analyse voor tuberculose doen

Hoewel de PCR-analyse voor tuberculose een zeer effectieve methode is voor het diagnosticeren van deze aandoening, wordt deze zelden alleen gebruikt. In de regel is dit een extra methode voor het opsporen van tuberculose en wordt deze niet vaak gebruikt. Feit is dat deze methode vrij duur is.

Openbare klinieken hebben niet de mogelijkheid om speciale apparatuur aan te schaffen voor het uitvoeren van PCR-analyses, en de overheid ziet het niet zitten in de financiering van dit artikel, omdat tuberculose op andere manieren kan worden gediagnosticeerd. Een dergelijke studie wordt meestal uitgevoerd in privéklinieken die het zich kunnen veroorloven om de benodigde apparatuur aan te schaffen.

Nadelen van de methode

De hoge prijs is niet het enige nadeel van PCR. Naast de hoge kosten heeft de methode nog andere nadelen en tekortkomingen, bijvoorbeeld:

• PCR voor tuberculose geeft een positief resultaat, zelfs na de behandeling, omdat het dode cellen als levende bacteriën nodig heeft, daarom is deze methode niet geschikt als een controleonderzoek van de patiënt om zijn herstel te bevestigen;
• tuberculosis bacillen muteren, en hun DNA is gemodificeerd, wat de betrouwbaarheid van het resultaat kan beïnvloeden;
• PCR-bloedonderzoeken voor tuberculose worden zelden uitgevoerd, omdat de aanwezigheid van Koch-sticks in deze biologische vloeistoffen buitengewoon moeilijk te detecteren is. Dit is alleen mogelijk in de laatste fasen of in sepsis. Gewoonlijk wordt het sputum van de patiënt gebruikt voor diagnose;

Het is vermeldenswaard dat het meest nauwkeurige resultaat juist het verzamelen van de inhoud van de maag van de patiënt is. Als longtuberculose wordt vermoed, is sputumkweek de meest effectieve manier om de ziekte te diagnosticeren. Als de patiënt een extrapulmonale vorm heeft, zijn er mogelijk geen bacteriën in deze bio-omgeving. Voor het bepalen van tuberculose van botten, gewrichten, enz. Met behulp van PCR, is een andere biologische vloeistof nodig, bijvoorbeeld spinale vloeistof.

Hoe is PCR voor tuberculose

Zoals eerder beschreven, is de essentie van PCR-analyse het detecteren van het DNA van het pathogeen in het biologische fluïdum van de patiënt door de polymerasereactie. De belangrijkste fasen van de methode:

1. Biologisch materiaal bemonsteren. PCR is niet alleen een hemostest - de bestudeerde biomassa kan speeksel, urine, hersenvocht, bronchiale wasvloeistof, maaginhoud, sputum zijn.
2. Daarna wordt de biomassa blootgesteld aan hoge temperaturen om de DNA-structuur van de ziekteverwekker te vernietigen.
3. Daarna neemt de temperatuur geleidelijk af en wordt een primer aan het vernietigde DNA-element gehecht.
4. Volgens de resultaten van moleculaire synthese, die ongeveer 30 cycli duurt, wordt de stam van een bepaalde pathogene bacterie gedetecteerd of afwezig.

Deze analyse vereist goede financiering, dus PCR wordt niet vaak gedaan. Deze methode heeft echter geen gelijke, wanneer andere diagnostische opties verboden zijn, of in geval van nood, wanneer er geen tijd is om op het resultaat te wachten.

Samenvattend

Samenvattend kunnen we de volgende conclusies trekken:

• PCR is een zeer nauwkeurige analyse die tuberculose enkele dagen na infectie kan detecteren;
• deze analyse gebeurt in 3,5 - 5 uur, dus in het geval dat de rekening naar de klok gaat, is het onvervangbaar;
• het is een veilige methode die geen bijwerkingen heeft;
• Het wordt gebruikt wanneer andere diagnostische methoden inconsistente resultaten hebben getoond of het gebruik ervan is gecontra-indiceerd.

PCR wordt echter zelden uitgevoerd, omdat het een dure analyse is waarvoor speciale apparatuur moet worden geïnstalleerd. Bovendien is het niet altijd informatief, dus experts gebruiken deze methode voor het detecteren van tuberculose als een extra.

PCR-analyse (diagnose) van tuberculose

Tuberculose of consumptie - een van de meest populaire infectieziekten van de 21e eeuw. Zijn pathogenen zijn speciale microbacteriën - Koch-sticks.

De ziekte wordt niet alleen naar de longen verspreid, maar ook naar de hersenen, de spijsvertering, de gewrichten of de wervelkolom, het urinewegstelsel en de huid.

Volgens de WHO lijden jaarlijks 10 miljoen mensen aan tuberculose, waarvan 3 miljoen dodelijk zijn.

De situatie is vooral triest op het grondgebied van de GOS-landen, hier komen periodiek tuberculeuze epidemieën voor. Rusland, Kazachstan, Oekraïne wordt geleid door een trieste beoordeling van de verspreiding van deze infectie.

De infectie wordt gemakkelijk overgedragen door druppeltjes in de lucht of door het spijsverteringsstelsel, beïnvloedt vitale organen en is ook in staat zich snel aan te passen aan polymere geneesmiddelen en chemotherapie.

Een van de belangrijkste factoren voor een succesvolle behandeling van tuberculose is de tijdige detectie van infecties.

Diagnostische methoden

De mens heeft veel methoden uitgevonden voor het herkennen van een gevaarlijke ziekte. Diagnose van tuberculose is onderverdeeld in instrumentaal en laboratorium.

In het eerste geval, een bloedtest voor tuberculose, evenals sputum, urine.

De tweede groep is een onderzoek met röntgen en endoscopie. Instrumentele methoden voor het diagnosticeren van tuberculose zijn op hun beurt bestraling en chirurgie.

Soorten stralingsmethoden voor het vinden van de ziekte

• Fluorografie is een methode voor het diagnosticeren van een ziekte die bij elke inwoner van het GOS bekend is. Met behulp van röntgenfoto's worden de longen en hilarische lymfeklieren onderzocht.
• X-thorax - vergelijkbaar met fluorografie, maar een betere methode om infecties te detecteren. De foto wordt in meer detail en in twee projecties verkregen, maar deze procedure is ongeveer zes keer duurder. Meestal wordt het gebruikt nadat ernstige vermoedens van de ziekte zijn ontstaan.
• Computertomografie wordt uitgevoerd als een aanvullende diagnose, ook gebruikt na een goede reden voor de aanwezigheid van een infectie.

Chirurgische methoden voor diagnose omvatten bronchiale endoscopie, evenals mediastinoscopie en thoracoscopie.

De eerste methode is om de bronchiale boom van de longen te bestuderen met behulp van een "sonde" in dit orgaan. De resterende twee methoden maken het mogelijk om het pleurale deel van de long te bestuderen door een punctie van de borstkas.

Alle drie de methoden zijn een ernstige chirurgische interventie en worden het vaakst gebruikt in het proces van ziekteprogressie.

Laboratoriumtests omvatten:

• Sputum-analyse voor tuberkelbacillus.
• Microscopisch onderzoek.
• PCR-diagnose van tuberculose

Wat is PCR-diagnose?

Een van de meest geavanceerde methoden voor laboratoriumdiagnose van infecties specialisten noemen polymerase kettingreactie.

Deze methode werd ontwikkeld door de beroemde Amerikaanse wetenschapper Carrie Mullis in 1983, waarvoor hij de Nobelprijs won.

PCR-analyse is de isolatie van DNA-deeltjes uit sputum, bloed, hersenvocht, uitwerpselen, enz. voor hun daaropvolgende biosynthese.

Met behulp van een complexe moleculair genetische studie, wordt de aard van de microben in het lichaam van de patiënt bepaald.

Dit soort analyse voor tuberculose wordt in verschillende fasen uitgevoerd:

• Eerst worden biologische monsters genomen. Materialen worden in speciale containers geplaatst en naar het laboratorium gestuurd.
• In het onderzoekscentrum worden de analyses tot 97 graden verwarmd. Dit maakt het mogelijk om de structuur van het genoom van het DNA van micro-organismen, dat uit meerdere ketens bestaat, te vernietigen.
• De temperatuur wordt specifiek verlaagd, zodat de primers (DNA-deelnemers waarvan het biosyntheseproces begint) verbinding kunnen maken met elke deoxyribonucleïnezuurketen.
• Daarna wordt de biosynthese van moleculen die nodig zijn voor detectie uitgevoerd.

Na 25-30 herhaalde cycli in het laboratoriumonderzoeksproces, hebben artsen de mogelijkheid om te herkennen of infectieuze micro-organismen aanwezig zijn in het lichaam van de patiënt of niet.

Voor- en nadelen

PCR voor tuberculose is de meest moderne diagnostische techniek. De methode maakt het mogelijk de infectie in elk stadium met hoge betrouwbaarheid te detecteren. voordelen:

• Snelheid - de studie duurt niet meer dan vijf uur. De resultaten van de test voor tuberculose-microben zijn binnen 24 uur te vinden.
• Veiligheid - PCR-methode kent geen contra-indicaties voor de leeftijd.
• Tijdigheid - met deze techniek kunt u tuberculose detecteren in die stadia waarin de ziekte geen symptomen heeft.
• Hoge nauwkeurigheid - als er slechts een paar micro-organismen in de analyses zitten, zullen ze worden gevonden met behulp van een polymerasekettingreactie. Ook maakt deze techniek het mogelijk om gemakkelijk de veroorzaker van tuberculose te identificeren.
• Veelzijdigheid - diagnostiek wordt niet alleen gebruikt voor de detectie van consumptie, maar ook voor andere ziekten zoals chlamydia, gonorroe, enz.

Ondanks de vele voordelen, is het gebruik van deze techniek in de huisartsenpraktijk eerder uitzondering dan regel. Daar zijn een aantal redenen voor.

De nadelen van deze methode zijn:

• De hoge kosten van de enquête.
• De methode is niet geschikt voor mensen die een therapie hebben ondergaan, omdat de aanwezigheid van dode Koch-bacteriën tot een vals-positief resultaat kan leiden.
• In het geval van mutatie van infectieuze micro-organismen kan hun genoom niet worden herkend door een verkeerde conclusie te trekken.
• Het is belangrijk om de juiste detectieomgeving te kiezen. Het resultaat van een bloedtest op PCR voor tuberculose (verdunning) zal bijvoorbeeld negatief zijn als het zenuwstelsel is geïnfecteerd.
• Het is niet altijd mogelijk om deze methode toe te passen op patiënten met longletsels.

Bovendien vereist een dergelijke analyse voor tuberculose moderne apparatuur die 90 procent van de ziekenhuizen niet heeft. In de CIS kan een dergelijke analyse worden uitgevoerd door het netwerk van Invitro-klinieken.

Voorwaarden van analyse

Aanbevelingen voor patiënten die een dergelijke test voor tuberculose ondergaan, zijn afhankelijk van het type analyse dat ze doormaken.

Bij het nemen van bloed voor PCR, is het noodzakelijk om te stoppen met roken een uur voor de procedure, gedurende twee uur - om alcohol en vet voedsel uit te sluiten.

Het wordt ook aanbevolen om af te zien van fysieke inspanning, het is ook onmogelijk om bloed te nemen voor tuberculose op een lege maag.

Wanneer u een wattenstaafje uit de mond en neusholte neemt, kunt u 2-4 uur voor de ingreep niet eten, anders is het geen informatief. Drink ook geen alcohol.

Voor nauwkeurige metingen is het verboden om eerder dan een uur voor de procedure te roken. Aan de vooravond, afzien van het tandenpoetsen en het gebruik van sprays en mondsprays.

Als u tuberculose van het urogenitale systeem vermoedt, moet de patiënt 2-3 dagen vóór de bevalling geslacht uitsluiten, 2-3 uur voor de ingreep niet "op een kleine manier" naar het toilet gaan. Geslachtsorganen moeten zonder speciaal water worden gewassen met gewoon water.

Vrouwen wordt geadviseerd om geen vaginale tabletten, kaarsen, ballen te gebruiken en ook om niet te testen op kritieke dagen.

5 dagen voorafgaand aan de bevalling, is het resultaat noodzakelijk om de procedure van colposcopie en transvaginale echografie op te geven,

Wanneer wordt PCR-diagnostiek gebruikt?

Niet elke kliniek heeft zo'n complexe diagnose, maar artsen gaan steeds meer over tot dergelijke onderzoeksmethoden. Meestal wordt dit soort analyse uitgevoerd in speciale situaties.

• Bij twijfelachtige resultaten van manta kan een bloedtest voor tuberculose worden gebruikt.
• In gevallen waarin de patiënt in contact is geweest met een geïnfecteerde persoon, maar de behandelend arts kan de diagnose niet nauwkeurig vaststellen.
• In geval van een spoedoperatie, wanneer het nodig is om in een korte tijd uit te zoeken of de patiënt deze infectie heeft.
• Wanneer een patiënt zwanger is, wanneer andere onderzoeksmethoden niet veilig genoeg zijn voor een pasgeboren baby.

Opgemerkt moet worden dat deze diagnose wordt aanbevolen voor kinderen vanwege de veiligheid ervan.

Als een student contra-indicaties tegen een tuberculinatie-test heeft, kan hij een bloedtest voor tuberculose in plaats van mantel met behulp van PCR.

PCR-analyse voor tuberculose

PCR-analyse voor tuberculose is het meest populair bij medisch onderzoek op het gebied van deze ziekte.

Maar hoe kunt u uzelf en uw dierbaren waarschuwen voor deze vreselijke ziekte? Hoe de noodzakelijke tests voor PCR door te geven?

Symptomen van tuberculose en de preventie ervan

Experts zeggen dat ongeveer 30% van de totale bevolking lijdt aan tuberculose.

Het hoogste percentage van de ziekte wordt ontwikkeld in niet-ontwikkelde landen. Dit komt meestal voor als gevolg van verminderde immuniteit bij mensen.

De ziekte is een van de oudste. Deze ziekte kan worden gevonden in de bekleding van de hersenen, in het spijsverteringskanaal, op de gewrichten en de wervelkolom, in het urinewegstelsel en in kleine gebieden op de menselijke huid.

Experts bepalen het gemakkelijkst de aangetaste huid. Op de site zijn er kleine zeehonden, die in de loop van de tijd groter worden, barsten uit met witachtige vloeistof.

De veroorzaker van tuberculose kan meestal worden opgepakt wanneer ze met een zieke persoon praten, wanneer ze hoesten of niezen. Meestal gaat de ziekte voort zonder symptomen of heeft een open vorm, maar PCR-diagnose van tuberculose maakt het mogelijk om het te detecteren in de vroege stadia en in noodgevallen.

Symptomen van de ziekte: langdurige natte hoest, koorts, rillingen, overmatig zweten 's nachts, een sterk gewichtsverlies, gevoel van vermoeidheid en zwakte.

De open vorm van de ziekte is het gevaarlijkst. Een persoon die lijdt aan tuberculose kan gezonde mensen infecteren.

Het belangrijkste symptoom van longziekte is bloedspuwing. Het komt voor in elke vorm van de ziekte.

In sommige situaties kan dit leiden tot bloeden uit de longen van een persoon. Het is erg gevaarlijk en vereist dringend medisch ingrijpen.

Voor de preventie en herkenning van tuberculose schrijven deskundigen voor: een monster - een tuberculinatie, een onderzoek van biologisch materiaal, fluorografie, röntgenfoto's en een bloedtest, sputum of speeksel.

Diagnose van de ziekte

Verbeterde diagnose van de ziekte - dit is de juiste en tijdens de behandeling gestart. In de meeste gevallen hebben de gebruikelijke methoden voor het detecteren van pathogenen niet altijd een effect en zijn ze al verouderd.

De belangrijkste manier om longaandoeningen te identificeren en diagnosticeren, zijn medische onderzoekstests. Gebruik meestal PCR-diagnostiek. Dit onderzoek werd vrij recent ontdekt, in 1983, door de Amerikaanse biochemicus Mullis.

De test bij een patiënt met longtuberculose wordt uitsluitend in speciale gevallen uitgevoerd wanneer het moeilijk is om de diagnose vast te stellen of het onmogelijk is om de ziekte op een instrumentele manier te detecteren.

Polymerase-kettingreactie is een betrouwbare PCR-methode. Deze analyse maakt het mogelijk om de veroorzaker te bepalen hoeveel het is in de bloed-, urine- en ruggenmergvloeistoffen. Zo'n medisch onderzoek is het veiligst.

PCR-analyse geeft 100% resultaat.

Het heeft een hoge gevoeligheid, wat helpt om de ziekte voor het eerst uren na infectie te herkennen, voordat de symptomen van de ziekte verschijnen. Deze analysemethode geeft het resultaat binnen enkele uren na de levering van biologisch materiaal. Het zaaien van deze analyse wordt driemaal uitgevoerd, maar aspiratie van de zieke maag wordt alleen in het ziekenhuis uitgevoerd.

Drie criteria werden ontwikkeld om de resultaten te bepalen: hoge nauwkeurigheid, gevoeligheid tot 90%, specificiteit.

De test voor PCR wordt in sommige gevallen gebruikt:

1. om longtuberculose te diagnosticeren;
2. de bron van de ziekte bepalen;
3. definitie van extrapulmonale lokalisatie;
4. diagnose van recidief.

Evalueer het resultaat en schrijf de juiste medische behandeling voor, kan alleen een specialist. Het is erg belangrijk om het juiste schema van medische behandeling toe te wijzen voor de detectie van tuberculose, het is noodzakelijk om een ​​test uit te voeren voor de gevoeligheid van het pathogeen voor tuberculose-apparaten.

Een verscheidenheid aan tuberculose medische tests

U kunt de noodzakelijke analyse op twee manieren uitvoeren: neem bloed of speeksel van een persoon of neem een ​​sputum.

Bloedonderzoeken met PCR kunnen van twee soorten zijn: ELISA en PCR. Zo'n onderzoek helpt om de effectiviteit van medische behandelingen te bewaken.

Een ELISA helpt bij het vinden van antilichamen in het menselijk lichaam die tuberculose-microben weerstaan. Deze studie wordt één keer per dag uitgevoerd. Het grootste nadeel is de lage gevoeligheid, waardoor het mogelijk is om alleen een ziekte met een laag infectieniveau te bepalen.

Het meest populaire en effectieve onderzoek is de analyse van mycobacterium tuberculosis. Met haar kunnen artsen gemakkelijk het DNA van bacteriën in menselijk bloed vinden. Deze methode wordt ook gebruikt om het aantal bacteriën te bepalen, om de behandeling van de patiënt te regelen, om vroegtijdig recidief te detecteren.

PCR-speeksel is een van de meest geavanceerde onderzoeksmethoden. Een dergelijke analyse helpt infectieuze bacteriën in het speeksel te identificeren. Het gebruik van PCR verhoogt het aantal DNA-fragmenten van schadelijke microben.

De kweekmethode is bedoeld voor het onderzoeken van menselijk sputum, voor de detectie van microbacteriën.

Voorbereiding op PCR-testen

Let op, je hebt de juiste voorbereiding van speeksel nodig voor PCR. Als niet aan alle voorschriften wordt voldaan, kan de analyse vals-positief zijn.

Voordat u de test uitvoert, is het verboden om te roken, voedsel en medicijnen in te nemen en 12 uur lang alcohol te gebruiken. Het is verboden om uw tanden te poetsen, u kunt geen glansmiddel, mondverfrisser en tandzijde gebruiken.

Het is verboden lippenstift te gebruiken en intieme relaties aan te gaan. Laat je mond spoelen met gewoon gekookt water;

Dit onderzoek zal helpen identificeren: herpes, chlamydia, tuberculose, pathogenen van pneumonie, oncovirussen, barolleosis, mononucleosis, HIV, alle soorten hepatitis, rubella.

De analyse voor mycobacteriën wordt voornamelijk uitgevoerd in controversiële gevallen, namelijk als het moeilijk is om een ​​diagnose te stellen of er was contact met een patiënt met tuberculose, voordat de operatie begon, om de ziekte te detecteren. Gebruikt voor onderzoek van een zwangere vrouw, omdat deze methode het veiligst is voor moeder en foetus.

Soms wordt de analyse uitgevoerd in een privékliniek, omdat de patiënt zich niet aan de regels voor het testen hield, maar tegelijkertijd maakt hij zich zorgen over alle symptomen. De analyse kan worden uitgevoerd wanneer specialisten niet zeker zijn na het uitvoeren van een Mantoux-test of als de patiënt een kind is.

Voor- en nadelen van medische tests voor de bepaling van tuberculose

PCR is de meest populaire en effectieve manier om de ziekte te bepalen.

Het grootste verschil met andere onderzoeken is een snel en nauwkeurig resultaat.

Het voordeel van dit medisch onderzoek is dat het kan worden uitgevoerd voor urologische, gynaecologische, oncologische, infectieuze, hematologische, pulmonaire, gastro-enterologische en andere studies.

Het grote voordeel van een dergelijke medische studie is dat bloedtesten, sputum en speeksel in korte tijd klaar zijn (het zal 5 uur duren om de ziekte op te sporen). Een dergelijk medisch onderzoek maakt het mogelijk dat tests worden uitgevoerd wanneer bepaalde methoden voor het bestuderen van een ziekte verboden of ontoegankelijk zijn. Geweldig voor het detecteren van recidief bij mensen.

Dankzij deze analyse werd het mogelijk om onderzoek uit te voeren voor elke biologische omgeving. Het is toegestaan ​​om materiaal van kinderen te nemen. PCR maakt het mogelijk om de veroorzaker te identificeren in elk stadium van de ziekte. Vanwege zijn hoge gevoeligheid kunnen microben worden gevonden, zelfs als er maar een paar bacteriën aanwezig zijn.

De PCR-methode breidt zijn mogelijkheden uit. Het wordt ook gebruikt om het vaderschap vast te stellen, voor de vervaardiging van nieuwe genen, mutaties, voor het kruisen van DNA-elementen, enzovoort.

De nadelen van deze studie zijn een dure enquêtemethode.

Na een medische behandeling kan een bloedtest de aanwezigheid van levende of dode pathogenen in kleine hoeveelheden aantonen, na een medisch onderzoek zal dit een positief resultaat opleveren.

Bacteriën en microben kunnen een mutatie ondergaan, waarna de PCR ze niet kan identificeren en identificeren, daarom kan alleen een specialist een onderzoek naar de vereiste omgeving voorschrijven, anders zal zo'n medisch onderzoek niet effectief zijn.

Na het testen is er een negatief resultaat, maar dit sluit de mogelijkheid niet uit dat iemand besmet raakt met tuberculose. Een dergelijk medisch onderzoek wordt uitgevoerd voor patiënten met ernstige longziekte, wanneer andere onderzoeken geen nauwkeurige resultaten geven. PCR zal nuttig zijn voor mensen met pulmonaire en extrapulmonale tuberculose.

Helaas is medische apparatuur om tuberculosepathogenen te detecteren erg duur.

Openbare ziekenhuizen en klinieken kunnen het niet betalen, maar betaalde klinieken nemen patiënttests en leveren in korte tijd kant-en-klare resultaten.

PCR-diagnose van tuberculose

Tuberculose is een specifieke infectie, de focus ervan kan jarenlang in menselijke weefsels liggen en vervolgens gedurende enkele maanden worden verspreid. Dit is een chronische ziekte waarvan de optimale behandelingsregimes moeilijk te selecteren zijn. Een van de redenen hiervoor is de late diagnose, wanneer mycobacteriën, terwijl ze zich in het menselijk lichaam bevinden, al aan veel medicijnen zijn aangepast.

Welke moderne diagnosemethoden bestaan ​​er? PCR-diagnose - wat is het? Hoe wordt dit onderzoek gedaan? In welke gevallen wordt met deze methode tuberculose gediagnosticeerd en wat is de essentie ervan?

Wat is PCR-diagnostiek

Dit is een van de modernste methoden om niet alleen ziekten te diagnosticeren, maar ook om biologisch materiaal te detecteren. PCR-diagnostiek is relatief recent uitgevonden. Ongeveer 30 jaar geleden, in 1983, stelde een Amerikaanse biochemicus, Carey Banks Mullis, een complex herstelplan voor het biologische materiaal van micro-organismen voor in een kort segment. Dankzij zijn ontdekking kreeg de wetenschapper de hoogste onderscheiding - de Nobelprijs.

Wat is het - PCR-diagnose van infecties? Polymerase-kettingreactie (PCR) is een diagnose van de detectie van virale ziekten, gebaseerd op werkwijzen van genetische manipulatie. Het wordt veel gebruikt in de medische microbiologie, immunologie en virologie. De methode is universeel en helpt om een ​​diagnose te stellen met een kleine hoeveelheid materiaal. Een infectie kan letterlijk worden gedetecteerd in de eerste uren van infectie ermee, lang voordat de eerste symptomen van de ziekte verschijnen.

De methode bestaat erin om uit het materiaal van een zieke persoon niet de ziekteverwekker zelf te halen, maar fragmenten van het genoom (DNA-deeltjes), de biosynthese ervan met daaropvolgende bepaling tot welke klasse van micro-organismen het verkregen genetische materiaal behoort door middel van moleculair genetische methoden.

Ondanks het feit dat dit een complex proces is, kost het veel minder tijd dan veel biologische methoden voor het detecteren van infectieuze agentia. Binnen slechts een paar uur kan een micro-organisme worden gedetecteerd met behulp van PCR. Om dit te doen, is het niet nodig om het te isoleren van de omgeving (bloed, hersenvocht, sputum) en het te laten groeien op kunstmatige voedingsmedia. Het is voldoende dat een klein fragment van de DNA-streng van het infectieuze agens aanwezig is in het materiaal dat wordt bestudeerd.

De basis van de reactie is de mogelijkheid onder kunstmatige omstandigheden (in vitro) om de synthese van nucleïnezuurmoleculen van het infectieuze agens te creëren.

Wat is nodig voor PCR?

1. Primers zijn de DNA-segmenten waaruit biosynthese of creatie begint.
2. Nucleotiden of complexe verbindingen die de basis vormen van een DNA- of RNA-molecuul.
3. Polymerase kettingreactie is onmogelijk zonder de aanwezigheid van polymerase, wat een enzym is dat de PCR versnelt.

Stadia van PCR-diagnostiek

Hoe wordt moleculaire diagnose uitgevoerd door PCR? De procedure is eenvoudig en neemt een korte tijd in beslag, rekening houdend met de verzameling van materiaal.

1. Voordat ze met het onderzoek beginnen, nemen ze het nodige biologische materiaal in - dit is het bronchiale waswater, bloed, maaginhoud, sputum. Het type biologisch materiaal hangt af van het vermoedelijke pathogeen.
2. Denaturatie of vernietiging van de primaire structuur van DNA, dat uit twee ketens bestaat. De essentie van deze fase is om de twee ketens te scheiden onder invloed van hoge temperaturen (het maximum is 98 ºC, dat niet langer duurt dan twee minuten).
3. In het volgende stadium van PCR, genaamd uitgloeien, wordt de temperatuur met verschillende graden verlaagd, zodat de primer aan de DNA-streng zal binden.
4. Verlenging, waarbij de synthese van de gewenste moleculen direct plaatsvindt.

Als resultaat ontvangen slechts 25-30 van dergelijke cycli het noodzakelijke aantal kopieën van het DNA van het micro-organisme, die gemakkelijk te herkennen zijn.

Vereist PCR een diagnose van tuberculose?

Het is niet mogelijk voor absoluut alle mensen met vermoedelijke tuberculose om PCR uit te voeren, omdat de methode dure apparatuur vereist. Niet alle openbare klinieken kunnen het zich veroorloven om het te kopen. Bovendien was het zo dat de gebruikelijke methoden om een ​​infectie te diagnosticeren in de meeste gevallen ook zichzelf rechtvaardigen.

Deze omvatten:

• patiëntonderzoek, geschiedenis nemen;
• volledig onderzoek van de persoon;
• een studie met de tuberculinetest van Mantoux;
• radiografie of fluorografie;
• computer diagnostiek indien nodig;
• microbiologische onderzoeksmethoden: uitstrijk microscopie en sputum bacteriologisch onderzoek.

PCR voor tuberculose wordt in speciale gevallen uitgevoerd wanneer het moeilijk is om een ​​diagnose te stellen of het niet mogelijk is om andere instrumentele methoden uit te voeren.

Ondanks de overvloed aan diagnostische methoden, blijft de incidentie van tuberculose toenemen. Momenteel is er niet alleen de groei, maar ook andere kenmerken:

• de ziekte komt vaak in ernstige vorm voor;
• het aantal dodelijke gevallen neemt toe;
• steeds resistenter tegen moderne chemotherapie zijn gediagnostiseerde vormen van de ziekte.

De terughoudendheid van de mensen zelf om jaarlijks routine-medische onderzoeken te ondergaan, de afwijzing van vaccinatie leidt tot de verspreiding van tuberculose. In dergelijke omstandigheden hebben we snelle, informatieve en effectieve onderzoeksmethoden nodig die toegankelijk moeten zijn voor kinderen en volwassenen. Alle bovenstaande diagnostische methoden zijn veel slechter dan PCR.

Voordelen van het diagnosticeren van tuberculose met PCR

Dit onderzoek, hoewel nieuw, heeft zichzelf goed bewezen, vooral in controversiële gevallen waarin het onmogelijk is om een ​​diagnose te stellen om een ​​aantal redenen.

Dankzij PCR is het veel gemakkelijker om de veroorzaker van tuberculose in het testmateriaal te detecteren.

De voordelen van PCR-diagnose zijn als volgt.

1. Dit is een snelle analyse. Een klein fragment van het DNA-molecuul kan worden gebruikt om binnen enkele uren (ongeveer vijf) een diagnose te stellen, die met succes wordt gebruikt in noodsituaties, wanneer bijvoorbeeld vóór een operatie moet worden vastgesteld of iemand ziek is van tuberculose.
2. PCR-analyse is toegestaan ​​in het geval dat andere methoden niet beschikbaar of verboden zijn (voor de detectie van longtuberculose, moet u soms meerdere radiografische beelden maken, wat een grote dosis straling zal zijn).
3. Met behulp van PCR wordt elke biologische omgeving onderzocht op de aanwezigheid van een pathogeen daarin. U kunt bijvoorbeeld een studie van hersenvocht uitvoeren, als er een vermoeden bestaat van tuberculeuze meningitis.
4. Toegestane PCR-diagnose van infectieziekten bij kinderen, omdat de methode veilig is.
5. Hiermee kunt u de ziekteverwekker in elk stadium van de ziekte identificeren.
6. De hoge gevoeligheid van PCR maakt het mogelijk om Mycobacterium tuberculosis te detecteren, zelfs als er slechts een paar micro-organismen in het biologische materiaal aanwezig zijn.
7. Het is goed om uit te voeren voor de diagnose van ziekte-recidief.

Immers de lees-PCR lijkt een bijna perfecte diagnostische methode, die iedereen met verdenking van tuberculose zou moeten maken. Maar er zijn ook nadelen, ze moeten in aanmerking worden genomen.

Nadelen van PCR bij de diagnose van tuberculose

In onze tijd zijn dergelijke diagnoses zeldzamer dan regelmaat. En daarvoor is er reden.

1. Dit is een dure onderzoeksmethode. In veel klinieken is apparatuur voor PCR afwezig vanwege de hoge kosten, maar analyse kan nog steeds worden uitgevoerd in betaalde laboratoria.
2. Direct na de behandeling kunnen dode mycobacteriën of in kleine hoeveelheden leven nog aanwezig zijn in het menselijk lichaam (het resultaat zal positief zijn tijdens PCR-diagnostiek), dus de methode zal op dit moment onbetrouwbaar zijn, het heeft geen zin om het uit te voeren.
3. Mutaties van mycobacteriën resulteren in niet-effectieve PCR - een normale DNA-strengsequentie kan niet worden gesynthetiseerd.
4. Het is noodzakelijk om de juiste omgeving voor de studie te kiezen, bloed wordt alleen ingenomen als het wordt vermoed besmet te zijn (sepsis), het is niet nodig om sputum te nemen als er sprake is van tuberculose van de organen van het zenuwstelsel. In dit geval kan de PCR het pathogeen niet detecteren en is de diagnose niet informatief.

Indicaties voor het detecteren van tuberculose met behulp van PCR-analyse

PCR-diagnose van tuberculose wordt het vaakst uitgevoerd in controversiële gevallen. Wanneer verwijzen artsen naar deze studie?

1. Als het moeilijk is om een ​​diagnose te stellen met behulp van de gebruikelijke beschikbare methoden, maar er was contact met een patiënt met tuberculose.
2. In het geval dat een persoon niet aan een kliniek kan worden afgeleverd om routinematige routinetests voor tuberculose te ondergaan, is het gemakkelijker om hem met PCR te onderzoeken, omdat het sputum voor de test in een pot kan worden afgeleverd en de diagnose binnen een paar uur wordt bevestigd.
3. Als een persoon een spoedoperatie gaat krijgen en het is dringend nodig om uit te zoeken of hij ziek is van tuberculose.
4. Indien nodig, is een zwangere vrouw ook beter om te onderzoeken op tuberculose met behulp van PCR, omdat de methode veilig is.
5. Op betaalde basis is iedereen die niet is gediagnosticeerd met tuberculose bevestigd met bacteriologische methoden en fluoroscopie. Dit gebeurt wanneer de laesie in de longen onmerkbaar is in het directe beeld en de persoon tijdens de bevalling van sputum voor het onderzoek de aanbevelingen voor de juiste verzameling van materiaal niet kon volgen. In dit geval maakt de persoon zich zorgen over alle symptomen die kenmerkend zijn voor longtuberculose.
6. Als er twijfels zijn over de resultaten van de Mantoux-test.
7. Het verdient de voorkeur een PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen te doen. De procedure is veilig, creëert geen extra blootstelling aan straling en is effectief bij het opsporen van moeilijk te diagnosticeren vormen van de ziekte.

Tijdige diagnose van tuberculose is de sleutel tot een goed voorgeschreven behandeling en het verminderen van de verspreiding van de ziekte. Vaak zijn bekende ziektedetectiemethoden niet altijd effectief. Daarom is PCR vandaag de dag een van de meest betrouwbare en veilige manieren om infectie te detecteren in de vroege stadia van zijn ontwikkeling.