De Wereldgezondheidsorganisatie erkende 20 jaar geleden dat de verspreiding van tuberculose uit de hand gelopen was en de omvang van een epidemie bereikte. Sindsdien is de situatie niet verbeterd. Jaarlijks worden meer dan een miljoen gevallen van de ziekte gediagnosticeerd, waarvan bijna een kwart dodelijk is. In het laatste decennium is de incidentie van kinderen toegenomen, de meeste vormen van de ziekte lenen zich niet voor standaard antibiotische therapie.
Tegenwoordig is een van de wereldwijde taken voor de geneeskunde de ontwikkeling van dergelijke diagnostische methoden die het mogelijk maken om pathologie te identificeren vóór het begin van uitgesproken klinische symptomen. Een daarvan is de polymerasekettingreactie (PCR) voor tuberculose, die helpt om Koch-ziekteverwekkende sticks in bloed, sputum en andere biologische vloeistoffen te detecteren.
Diagnose van tuberculose
Screeningtests zijn gericht op het detecteren van patiënten, dragers van tuberculose en het voorkomen van de verspreiding van infecties in de samenleving. Voor kinderen onder de 14 jaar wordt de Mantoux-test massaal gebruikt. Dit is een immunologische test waarbij een dosis tuberculine subcutaan wordt geïnjecteerd - een complex mengsel van het genetisch materiaal van verschillende soorten mycobacteriën. Het verschijnen van een uitgesproken reactie duidt op een actief voorkomend infectieus proces.
Voor preventief onderzoek bij volwassenen met fluorografie of röntgenfoto's. Deze methoden helpen bij het visualiseren van pathologische laesies in longweefsel. Het veroorzaakt echter moeilijkheden bij het onderscheiden van tuberculose van een andere organische pathologie (kwaadaardige en goedaardige neoplasmata, ontstekingsprocessen, parasitaire invasies, professionele longschade).
Om de structuur en de omvang van de pathologische focus te verduidelijken, zijn aanvullende instrumentele onderzoeken nodig:
- gerichte radiografie;
- computertomografie;
- magnetische resonantie beeldvorming.
Methoden voor de diagnose van tuberculose
In het geval van twijfelachtige resultaten en voor de benoeming van adequate therapie, is er behoefte aan nauwkeurigere diagnostische methoden die het mogelijk maken om de pathogeen te isoleren. Microscopisch en bacteriologisch onderzoek van sputum wordt gebruikt om lange tijd longvormen van tuberculose te bevestigen.
In de afgelopen jaren is de incidentie van mycobacterium van verschillende organen en systemen - de nieren, botten, darmen, huid - frequenter geworden. Om deze vormen van tuberculose, echoscopische onderzoeken, urine- en feceskweek te identificeren, kunnen endoscopische onderzoeken worden gebruikt.
PCR-diagnostiek voor tuberculose zal helpen de aanwezigheid van Koch-stengels in het bloed te bevestigen, evenals de gevoeligheid voor bepaalde geneesmiddelen. Dit is een zeer effectieve methode op basis van de detectie van het bacterieel genetisch materiaal in verschillende biologische vloeistoffen.
Specificiteit en indicaties
Polymerase-kettingreactie is een zeer gevoelige microbiologische diagnostische methode, die is gebaseerd op de principes van genetische manipulatie. Om de aanwezigheid van een pathogeen in een biologisch materiaal te bevestigen, is het voldoende om daarvoor een uniek nucleïnezuurfragment te detecteren. PCR voor tuberculose kan bacteriën in het bloed, sputum, urine detecteren.
Op dit moment zijn verschillende analysemethoden ontwikkeld. De meest populaire onder hen zijn de volgende:
- Real-time PCR;
- microfluïdische technologie;
- sequencing en pyrosequencing.
Real-time PCR
Laboratoria gebruiken meestal real-time polymerasekettingreactie, omdat het het aantal foutpositieve resultaten vermindert en het analyseproces zelf een korte tijd kost.
Gezien het grote aantal verborgen vormen van de ziekte en de ineffectiviteit van standaard diagnostische methoden, wordt PCR in toenemende mate gebruikt. Het doel van deze analyse wordt getoond bij:
- verdachte gebieden op de röntgenfoto identificeren;
- twijfelachtige resultaten van tuberculinatie;
- de onmogelijkheid om microscopisch en bacteriologisch onderzoek uit te voeren van sputum bij personen in ernstige toestand;
- het uitvoeren van chirurgische ingrepen wanneer het nodig is om snel te verzekeren dat er geen infectie is;
- de onontvankelijkheid van het gebruik van fluorografie, röntgenfoto's of computertomografie (bijvoorbeeld bij zwangere vrouwen en bij borstvoeding, in geval van overmatige blootstelling aan straling);
- vermoedelijke extrapulmonale tuberculose (aanbevolen wordt niet alleen bloed maar ook slijm te gebruiken).
PCR-diagnostiek van tuberculose heeft zichzelf bewezen bij het onderzoek van kinderen, vanwege het gebrek aan extra blootstelling en snelle resultaten.
Voorbereiding en analyseprocedure
Speciale voorbereiding voor bloed-PCR is niet vereist. Om echter complicaties bij het nemen van bloedmonsters te voorkomen en om materiaal van hoge kwaliteit te verkrijgen, moeten de volgende algemene regels worden gevolgd:
- de analyse dient 's morgens niet eerder te worden gedaan dan 2 uur na het ontwaken;
- Het moet de inname van vet en gefrituurd voedsel een dag vóór het nemen van bloedmonsters beperken;
- afzien van eten, thee en koffie gedurende 8-9 uur, het is toegestaan om schoon water te drinken;
- Rook niet gedurende minstens 3-4 uur.
In het geval van permanente medicatie (hormonen, anticoagulantia, ontstekingsremmers, antibiotica, bloedverdunners), moet u dit aan de laborant melden.
Bij aflevering van sputum moet u uw tanden goed poetsen en uw mond meerdere malen spoelen. Verzamel materiaal in een steriele container. Voor betere resultaten kan 's avonds een slijmoplossend of mucolytisch middel worden ingenomen.
De diagnose zelf bestaat uit verschillende stadia.
- Hekmateriaal. Het kan worden uitgevoerd in het laboratorium en op afstand. Sommige soorten materiaal verzamelt de patiënt zelfstandig (urine, slijm).
De vernietiging van de structuur van nucleïnezuren (denaturatie van DNA- en RNA-moleculen). Om dit te doen, wordt het testmateriaal verwarmd tot een temperatuur van 98 graden en gedurende enkele minuten vastgehouden. Dientengevolge worden de dubbele helix afwikkelt, worden enkelstrengs moleculen gevormd.
Om de studie te voltooien, is het noodzakelijk om het vereiste aantal DNA-moleculen te synthetiseren - ongeveer 50 cycli van de bovenstaande reactie. Het duurt ongeveer 2-3 uur. Een positief resultaat van de reactie wijst niet altijd op het actieve stadium van de ziekte, maar is een indicator van de aanwezigheid van een micro-organisme in het lichaam.
Voor- en nadelen van de methode
In vergelijking met andere microbiologische methoden, kost PCR niet veel tijd om Mycobacterium tuberculosis te detecteren met behulp van PCR, het resultaat kan worden verkregen op de dag van testen.
Een ander voordeel is de hoge specificiteit van de analyse, die het mogelijk maakt om de aanwezigheid van de ziekteverwekker te detecteren met een nauwkeurigheid van 90-95% in bijna elk biomateriaal (bloed, urine, uitwerpselen, hersenvocht, sputum, bronchusspoeling).
Er zijn echter verschillende nadelen van de methode:
- een vrij hoog percentage fout-positieve resultaten (tot 15%), wat geassocieerd is met de detectie van niet-levende micro-organismen;
- in sommige gevallen kunt u het feit van de ziekte overslaan, aangezien Mycobacterium tuberculosis vaak wordt onderworpen aan mutaties en het genetisch materiaal verandert;
- lage efficiëntie bij het onderzoek van mensen met immunodeficiëntie;
- hoge kosten van onderzoek, de behoefte aan dure apparatuur en reagentia.
Wat kan worden vervangen?
Gezien de verscheidenheid aan vormen van tuberculose-infectie, voor een meer accurate diagnose en keuze van behandeling, is het noodzakelijk om verschillende diagnostische onderzoeken te combineren:
- Verplichte analyse voor kinderen is de Mantoux-test. Als de introductie van tuberculine (genetisch materiaal van mycobacteriën) een uitgesproken reactie is, kan worden aangenomen dat het een infectie met een tuberkelbacillus heeft.
Röntgenmethoden kunnen worden gebruikt om de pathologische focus te visualiseren. Bij de diagnose van extrapulmonale tuberculose worden endoscopische methoden gebruikt bij gelijktijdige biopsie:
- bronchoscopie helpt bij het identificeren van laesies van het strottenhoofd, luchtpijp, bronchiën;
- colonoscopie - darmen;
- cystourethroscopy - organen van het urinestelsel;
- hysteroscopie - vrouwelijke geslachtsorganen. Deze methoden zijn niet specifiek, voor het maken van een nauwkeurige diagnose moet het pathogeen worden geïdentificeerd.
Algemene klinische tests zullen helpen om meer specifiek de toestand van het lichaam te bepalen. Een complete bloedtelling met leukocytenformule is vereist.
Een toename van het aantal neutrofielen met een verlaagd niveau van lymfocyten en een toename van de erythrocytensedimentatiesnelheid (ESR) duidt op een actief ontstekingsproces van bacteriële etiologie. Om schade aan de organen van het urinestelsel uit te sluiten met behulp van een algemene urinalyse en kweek voor steriliteit.
PCR is momenteel beschikbaar in de meeste privélaboratoria. Dit vereist niet alleen hooggekwalificeerde specialisten, maar ook dure apparatuur, een groot aantal reagentia. Daarom is het gebruik van deze methode beperkt, ondanks de hoge nauwkeurigheid en specificiteit.
PCR-analyse voor tuberculose
In het geval van een vermoede ziekte, is het beter om onmiddellijk de PCR-analyse voor tuberculose te passeren. Tijdens deze studie wordt bloed afgenomen, wat onder een microscoop wordt gecontroleerd. Polymeer kettingreactie begon steeds meer de Mantoux-test te vervangen om tuberculose te detecteren.
Voordelen van de methode
Deze analyse na enkele uren bepaalt de aanwezigheid van de ziekteverwekker. Als er bovendien een kleine hoeveelheid bacteriën in het lichaam aanwezig is, kan deze methode deze nog steeds identificeren.
De belangrijkste voordelen van de PCR-test zijn de volgende positieve punten:
- De ziekte wordt in 100% van de gevallen gedetecteerd.
- De specificiteit van het DNA van het kantoor is hoog.
- De analyse onthult de veroorzaker in 4-4,5 uur.
- Longtuberculose is met succes gediagnosticeerd, waarmee andere methoden het niet kunnen.
- Het vermogen om een specifiek fragment te detecteren, dat zich in dit pathogeen bevindt.
Een polymeer kettingreactie maakt het niet alleen mogelijk om de causatieve agent tijdig te identificeren en om de behandeling van de patiënt te beginnen, maar het geeft ook de tijd om een persoon te isoleren van de maatschappij in geval van infectie. Koch's toverstaf - de veroorzaker van tuberculose - is overal in het lichaam te vinden. En alleen PCR-analyse maakt het mogelijk om het op de locatie te identificeren.
De PCR-studie biedt ook de mogelijkheid om een geneesmiddel te kiezen afhankelijk van de gevoeligheid van micro-organismen.
Ziekte beschrijving
In de negentiende eeuw werd tuberculose consumptie genoemd. De ziekte is een infectie van de inwendige organen, voornamelijk de longen. Tuberculose wordt overgedragen via niezen en hoesten in de lucht. Het doel van infectie kan zowel menselijk als dierlijk zijn.
Na de penetratie van tuberculosebacteriën in het lichaam kan de ziekte lang in latente vorm aanwezig blijven.
Afhankelijk van de mate van blootstelling van een zieke aan anderen, worden 2 vormen van de ziekte onderscheiden:
- Gesloten vorm van tuberculose. Het is niet gevaarlijk, omdat de mens kan anderen niet infecteren. Zelfs in analyses, incl. en PCR, mycobacterium ziekten worden niet gedetecteerd. Maar toch is het gevaar aanwezig in deze vorm, sindsdien op elk moment kan een gesloten vorm in de openbaarheid treden. Zo'n actieve vorm van tuberculose kan gevaarlijk zijn, niet alleen voor de patiënt zelf, maar ook voor degenen om hem heen.
- Een open vorm van infectie. Wanneer het zich in biologische vloeistoffen van een persoon bevindt, wordt Koch's stok gedetecteerd. Een patiënt met tuberculose in dit stadium draagt een bijzondere bedreiging voor de mensen om hem heen. U kunt geïnfecteerd raken, zelfs als de vervoerder zorgvuldig toeziet op het gebied van hygiëne.
De meest voorkomende onderzoeksmethoden die worden gebruikt om de ziekte te identificeren, zijn onder meer:
- Fluorografie.
- Tomografie van de borstkas of andere getroffen gebieden.
- Radiografische studie.
- De studie van de biologische materialen van de patiënt.
- Tuberculinatie (Mantoux).
De meest effectieve manier om de Koch-bacillus te identificeren, is de moleculair genetische analyse van de polymerasekettingreactie - PCR-diagnose van tuberculose.
Tuberculose-onderzoek
Polymerase kettingreactie is de meest accurate moleculair genetische analyse. Als een infectie met een tuberculose-infectie heeft plaatsgevonden, kunt u met de polymeertest van het onderzoek het DNA of RNA van de ziekteverwekker nauwkeurig identificeren. Om dit te doen, doneer bloed of andere biologische vloeistof.
Om de aanwezigheid van tuberculose te bepalen, volstaat een minimale hoeveelheid bacteriën, zelfs één cel zal het doen.
Andere voordelen van PCR-diagnostiek zijn onder andere:
- Bij het uitvoeren van deze analyse wordt een speciaal enzym gebruikt, waardoor de exacte aanwezigheid van tuberculose-infectie wordt gedetecteerd.
- PCR-analyse is bijzonder gevoelig voor infecties met mycobacterium, dus de diagnostische nauwkeurigheid is bijna 100%.
- Al na 3,5-5,5 uur nadat de test is uitgevoerd, is het mogelijk om de resultaten van de analyses te kennen.
Bij een ziekte zoals tuberculose is het erg belangrijk om de pathologie in een vroeg stadium te identificeren. Daarom is de test voor polymerasekettingreactie in dit geval het meest informatief. Wanneer de bacteriën net beginnen aan te vallen, moeten ze zo vroeg mogelijk worden gedetecteerd, totdat hun impact de vitale functies van de interne organen heeft aangetast.
PCR-analyse heeft nog een voordeel ten opzichte van andere soorten onderzoek: de techniek bepaalt de gevoeligheid van micro-organismen voor een bepaald medicijn, waardoor therapie het meest effectief is.
Voorbereiding op PCR-testen
Als speeksel toegeeft, is voorbereiding hiervoor vereist. 12 uur vóór de procedure moet u stoppen met roken, alcohol, medicijnen en voedsel. Poetsen van je tanden, je mond spoelen met verschillende verfrissende middelen en zelfs flossen is verboden. Je kunt ook geen lippenstift en seksleven gebruiken. Het is noodzakelijk om de mondholte met gekookt water te spoelen.
Niet alleen tuberculose wordt gedetecteerd door de PCR-methode. Op dezelfde manier kunnen niet minder ernstige ziekten zoals herpes, chlamydia, mononucleosis, pneumonie, barolleosis, HIV, hepatitis, rodehond worden ontdekt.
Bloed wordt meestal uit een ader gehaald, maar in sommige gevallen kan volledig ander biologisch materiaal nodig zijn:
- Speeksel.
- Urine analyse
- Schrapen vanuit elk deel van het lichaam.
- Seksuele afscheiding.
- Cal.
- Spinale vloeistof.
- Slijm uit de bronchiën tijdens slijm.
- Analyse van slijm.
Maar de meest informatieve methode van PCR is nog steeds een bloedtest voor tuberculose.
Verzameling van biomateriaal
Ondanks het feit dat de procedure voor het identificeren van het pathogeen door de PCR-methode slechts 4-4,5 uur duurt, is dit een van de moeilijkste diagnosetypen. Vele factoren kunnen de nauwkeurigheid van de resultaten beïnvloeden. Het is bijvoorbeeld noodzakelijk om monsters te verzamelen voor onderzoek volgens bepaalde regels. De belangrijkste is verhoogde steriliteit in de verzameling biologisch materiaal. Daarom is deze analyse moeilijk om een klein kind te leiden.
Als een monster wordt genomen als bloed uit een ader, voert een specialist een bloedtest voor PCR voor tuberculose uit, niet alleen met een steriele spuit, maar volgens alle regels van algemene hygiëne.
Het bloed wordt verzameld in een speciale reageerbuis en gedurende het hele onderzoek bewaard in dergelijke omstandigheden die de stolling ervan voorkomen.
Als dit een PCR-analyse van urine voor tuberculose is, wordt de vloeistof vroeg in de ochtend verzameld wanneer de persoon net wakker is. Voordat de patiënt naar het toilet gaat, neemt de patiënt een douche en neemt dan een steriele houder om de urine op te vangen.
In het geval van het afschrapen van de geslachtsdelen, zowel vrouwen als mannen, wordt de hele procedure uitgevoerd in een medische instelling.
Er zijn complexere tests, zoals het nemen van vocht uit het ruggenmerg. In dit geval worden alle acties in het ziekenhuis uitgevoerd door ervaren artsen.
Meestal wordt de passage van de analyse van de polymeer kettingreactie in dergelijke gevallen toegewezen:
- Om een ziekte in het longweefsel te diagnosticeren.
- Om de bron van de ziekte te identificeren.
- Om de ziekte buiten de longen te identificeren.
- Om de herhaling van de ziekte te diagnosticeren.
De volgorde van de test
Diagnose van tuberculose bij kinderen en volwassenen met behulp van een polymeer kettingreactie doorloopt de volgende stappen:
- In bepaalde situaties wordt ander materiaal gebruikt voor onderzoek. Dit kunnen bloed, sputum of bronchiale spoelingen zijn.
- Daarna wordt het biologische materiaal gedurende een bepaalde tijd blootgesteld aan hoge temperaturen (tot + 97 ° C) (meestal enkele minuten). Dientengevolge wordt de oorspronkelijke structuur van het DNA van het micro-organisme, dat uit 2 ketens bestaat, vernietigd.
- Hierna begint de temperatuur te dalen, deze actie heet uitgloeien. Op dit moment verbindt de primer met 1 van de losgekoppelde circuits.
- Aan het einde van de rek wordt uitgevoerd. Tijdens dit proces vindt de noodzakelijke biologische synthese van bestaande moleculen plaats.
Het duurt 25-30 cycli om het vereiste aantal kopieën van DNA op Mycobacterium tuberculosis te krijgen.
De procedure vereist dure apparatuur, dus niet alle medische instellingen hebben de mogelijkheid om een PCR-test uit te voeren voor tuberculose in plaats van Mantoux.
Dankzij vaccinaties en de studie van PCR (in plaats van Mantoux) is het mogelijk om de ontwikkeling van een dergelijke gevaarlijke ziekte, zoals tuberculose, te voorkomen. Nu hoeft u niet te wachten op het begin van de ziekte of foto's te maken op de röntgenmachine. Als er vermoedens van infectie zijn, om de vreselijke gevolgen van de ziekte te elimineren, kunt u altijd een PCR-test uitvoeren, die de conditie van het lichaam met maximale nauwkeurigheid bepaalt. In real-time omstandigheden vervagen dergelijke diagnostische vormen zoals de Mantoux-test en fluorografie geleidelijk naar de achtergrond in vergelijking met de PCR-methode.
Methoden voor het testen van sputum voor tuberculose
Sputum-analyse voor tuberculose is opgenomen in de reeks diagnostische maatregelen die nodig zijn om de diagnose te identificeren en te verduidelijken. Het sputumgehalte helpt een goed behandelingsregime te maken.
Hoe een sputumtest voor tuberculose te halen
Artsen hebben regels ontwikkeld voor het maken van de analyse. Speeksel wordt 's ochtends verzameld voordat de persoon heeft ontbeten. Eerst voert de patiënt hygiëneprocedures uit:
- reiniging tandglazuur;
- grondig spoelen met schoon water uit de mondholte en keelholte.
Dan begint de onmiddellijke levering van materiaal voor analyse. Hoe slaag ik in een sputumtest? Vereisten voor de procedure:
- Voorbereiding begint van tevoren, 's avonds. De patiënt wordt aangemoedigd om speciale medicijnen te nemen die de pulmonale secretie natuurlijker maken. Dit zijn slijmoplossend en verdunnende verbindingen. Als dergelijke procedures niet helpen, voer dan inhalatie uit met een farmaceutische samenstelling voor slijm.
- Containers voorbereiden op sputum. Mucus moet worden verzameld in gesteriliseerde schalen, strak sluiten, strak.
- Vóór de bevalling ophoesten en in een bak spugen. Het speeksel moet niet groot zijn, het heeft sputum van het strottenhoofd nodig. Bacteriën van de mondholte zijn vreemd in de analyse.
- Verzamel speeksel in een kamer met uitstekende ventilatie. De analyse wordt uitgevoerd door de spiegel te openen en de kap te laten lopen. Het is raadzaam om de ramen te openen of naar buiten te gaan.
Tijdens de procedure in de kamer is het verboden om binnen te komen. Buitenstaanders kunnen bijdragen aan de microflora van het kantoor, en dus aan het sputum, pathologische formaties. Medische hulpverleners ontvangen een analyse in een speciaal masker (gasmasker).
Sputum-analyse voor transcriptie van tuberculose
Decoderen begint met kijken naar het uiterlijk van het slijm. Pathologie karakteriseert de verandering in kleur - het wordt donker, met zichtbare toevoegingen van bloed. Kleur is niet de hoofdindicator. Sputum wordt donker door het drinken van rode wijn, koffiepassie. Sommige medicijnen en gekleurde dranken veranderen het uiterlijk van slijm.
Het verzamelde materiaal wordt ontcijferd door twee indicatoren, dat wil zeggen, artsen krijgen twee resultaten:
Positief antwoord
Analyse van het resulterende sputum bevestigt de aanwezigheid van de ziekte in het lichaam. Welke dit bevestigt:
- vreemde materie of onbekende insluitsels;
- de aanwezigheid van mucusstolsels;
- zichtbare strepen;
- onaangename purulente of infectieuze geur;
- pus.
Macroscopische onderzoeksmethode biedt andere gegevens:
- fibrineuze convoluties;
- Koch lens wand formaties;
- producten van ontbinding decompositie van bacteriële stoffen;
- resten van het pathologische proces in het longweefsel.
Een positief resultaat onthult een verhoogde hoeveelheid eiwitverbindingen. Het bereikt 100-120 g / l.
Een andere microscopische methode maakt het mogelijk om andere gevaarlijke elementen te identificeren:
- alveolaire macrofagen;
- overschat samenstelling van leukocyten;
- hoge snelheid van lymfocyten.
Bij tuberculose probeert iemand vaak uit zijn mond te spuwen. Hemoptys verhoogt de vorming van rode bloedcellen. De hoeveelheid speeksel in de mond is zodanig dat een persoon het niet kan inslikken zonder het te merken. Het is meer dan in een gezonde staat.
Negatief antwoord
De studie toont aan dat het aantal leukocyten klein is, overeenkomt met de norm. Microbacteriën worden ook niet gedetecteerd. Als de patiënt zich niet gezond voelt, zal de specialist een aanvullend onderzoek voorschrijven. Het is mogelijk dat de ziekte geassocieerd is met longziekte. Typen en methoden voor aanvullende diagnostiek zijn afhankelijk van de symptomen en de conditie van de patiënt.
Hoe is de studie van slijm
Tuberculose is een gevaarlijk pathologisch effect op longweefsel, hun desintegratie wordt waargenomen. De analyse wordt op verschillende manieren uitgevoerd. De meest voorkomende - ELISA (immunoassay). De essentie van de methode:
- Antilichamen worden toegevoegd aan de oplossing waarin een deel van het sputum is geplaatst.
- Controleer de concentratie van antigenen, vergeleken met de norm van een gezond lichaam.
- Bepaal de activiteit van de pathologische omgeving.
- Gediagnosticeerd.
De tweede versie van het laboratoriumonderzoek is WASTES. Neem voor de methode speciale medische apparatuur. De essentie van hardware-onderzoek:
- In de sputum geïnjecteerde micro-omgeving voor het beoogde type infectie.
- Het apparaat begint te groeien bij bepaalde temperatuurstammen van bacteriën.
- Koolstofdioxide wordt geproduceerd in het proces en sensoren halen het op.
- Het gas combineert met de kleurstof.
- Maak op de fluorescentie-index conclusies over het type ziekte.
De eenvoudigste manier is cultureel. Stuifmeel gezaaid in een speciale omgeving. De arts onderzoekt de soorten kolonies van microbiële formaties. De methode is het langst, maar stelt u in staat om de diagnose te bewijzen. Het wordt zeer zelden gebruikt, juist vanwege een lange periode van tijd, wat niet altijd geschikt is voor de patiënt.
Analyse van sputum pcr voor tuberculose
PCR is een afkorting van de medische term polymerasekettingreactie. Diagnostiek is een van de nieuwste ontwikkelingen van wetenschappers. Het werd geopend in 1983, het belang van ontdekking wordt gewaardeerd in de wereld, de wetenschapper ontving de hoogste erkenning - de Nobelprijs.
De methode is gebaseerd op het gebruik van genetische manipulatie. Zijn veelzijdigheid in de behoefte aan een kleine hoeveelheid materiaal voor een nauwkeurige diagnose. Identificatie van infectie met tuberculose is echt in de vroege uren van infectie, zonder te wachten op de ontwikkeling van de ziekte.
De essentie van de methode die polymerase is:
- een patiënt neemt een fragment van DNA-deeltjes;
- biologische synthese van het materiaal uitvoeren;
- bepaald door de klasse van micro-organismen.
Het proces is technologisch complex, het gaat om moleculair genetisch onderzoek. PCR voor tuberculose duurt letterlijk een paar uur. De tijd die nodig is voor andere methoden kan niet met snelheid worden vergeleken. Na het passeren van de analyse wacht de patiënt op de detectie van de veroorzaker. Het proces dat ten grondslag ligt aan alleen een specialist kan begrijpen. Een gewoon persoon begrijpt de fijne kneepjes van de methode niet.
Hoe is de diagnose van tuberculose tests:
- Neem het nodige materiaal voor analyse. Wat zou het kunnen zijn: bloed, maag, sputum, water, gewassen met bronchiën.
- Het type materiaal wordt gekozen afhankelijk van het type mogelijke pathogene infectie.
- De volgende stap is het bestuderen van de ketenverbinding. Twee kettingen worden onderworpen aan hoge temperaturen tot 98 graden. Het stadium wordt denaturatie genoemd (vernietiging van de structurele DNA-keten). Temperatuur belichtingstijd - tot 2 minuten.
- De volgende fase is gloeien. De temperatuur wordt verlaagd, de primer kan verbinding maken met de DNA-streng.
- Als gevolg hiervan treedt verlenging op - de synthese van moleculen die nodig zijn voor het proces.
Voor een dergelijke analyse is speciale apparatuur vereist. Het is duur, dus het is niet beschikbaar in een gezondheidszorginstelling. PCR wordt uitgevoerd in moeilijke gevallen, wanneer er geen exact resultaat is van conventionele diagnostische methoden, is het onmogelijk om instrumentele methoden uit te voeren voor het controleren van de toestand van de patiënt.
De voordelen van PCR-technologie:
- De snelheid van het behalen van het resultaat. Ongeveer 5 uur een arts heeft nauwkeurige gegevens. Met deze snelheid kunt u de patiënt in nood helpen. Vaker is het de pre-operatieve periode.
- Toegestaan als andere methoden niet kunnen worden gebruikt. De frequente herhaling van röntgenstralen leidt bijvoorbeeld tot straling. PCR is niet gevaarlijk voor de patiënt.
- Je kunt elke biologische omgeving verkennen. Zelfs complexe vormen van tuberculose worden geïdentificeerd.
- De methode is veilig, daarom geschikt voor kinderen.
- Infectie wordt in elk stadium gedetecteerd.
- PCR laat niet toe om zelfs een klein aantal bacteriële micro-formaties te verbergen.
- Geschikt om mogelijke herhaling van tuberculose te controleren.
Hoeveel doet sputum-analyse voor tuberculose
Er worden meer dan één keer monsters genomen. Herhalingen sluiten de mogelijkheid van fouten uit of het verkrijgen van materiaal van slechte kwaliteit dat de werkelijke positie en toestand van de patiënt niet weerspiegelt. Hoeveel keer om sputum te verzamelen, vertel het de behandelende arts. De beste optie is drie keer per dag. Soms zijn extra monsters nodig. Gedurende welke periode verzamelen zij:
- Voor het eten in de ochtend.
- 3-4 uur na de eerste test.
- Op de tweede dag, ook voor de maaltijd.
Tuberculose is een gevaarlijke ziekte die het lichaam van een persoon kan aantasten. Er zijn veel infectiesituaties. Probeer niet te wachten op heldere symptomen, met een verdenking van de mogelijkheid van infectie. Het moet worden getest, onderzocht en op tijd worden gegeven om met de behandeling te beginnen.
PCR-diagnose van tuberculose
Tuberculose is een specifieke infectie, de focus ervan kan jarenlang in menselijke weefsels liggen en vervolgens gedurende enkele maanden worden verspreid. Dit is een chronische ziekte waarvan de optimale behandelingsregimes moeilijk te selecteren zijn. Een van de redenen hiervoor is de late diagnose, wanneer mycobacteriën, terwijl ze zich in het menselijk lichaam bevinden, al aan veel medicijnen zijn aangepast.
Welke moderne diagnosemethoden bestaan er? PCR-diagnose - wat is het? Hoe wordt dit onderzoek gedaan? In welke gevallen wordt met deze methode tuberculose gediagnosticeerd en wat is de essentie ervan?
Wat is PCR-diagnostiek
Dit is een van de modernste methoden om niet alleen ziekten te diagnosticeren, maar ook om biologisch materiaal te detecteren. PCR-diagnostiek is relatief recent uitgevonden. Ongeveer 30 jaar geleden, in 1983, stelde een Amerikaanse biochemicus, Carey Banks Mullis, een complex herstelplan voor het biologische materiaal van micro-organismen voor in een kort segment. Dankzij zijn ontdekking kreeg de wetenschapper de hoogste onderscheiding - de Nobelprijs.
Wat is het - PCR-diagnose van infecties? Polymerase-kettingreactie (PCR) is een diagnose van de detectie van virale ziekten, gebaseerd op werkwijzen van genetische manipulatie. Het wordt veel gebruikt in de medische microbiologie, immunologie en virologie. De methode is universeel en helpt om een diagnose te stellen met een kleine hoeveelheid materiaal. Een infectie kan letterlijk worden gedetecteerd in de eerste uren van infectie ermee, lang voordat de eerste symptomen van de ziekte verschijnen.
De methode bestaat erin om uit het materiaal van een zieke persoon niet de ziekteverwekker zelf te halen, maar fragmenten van het genoom (DNA-deeltjes), de biosynthese ervan met daaropvolgende bepaling tot welke klasse van micro-organismen het verkregen genetische materiaal behoort door middel van moleculair genetische methoden.
Ondanks het feit dat dit een complex proces is, kost het veel minder tijd dan veel biologische methoden voor het detecteren van infectieuze agentia. Binnen slechts een paar uur kan een micro-organisme worden gedetecteerd met behulp van PCR. Om dit te doen, is het niet nodig om het te isoleren van de omgeving (bloed, hersenvocht, sputum) en het te laten groeien op kunstmatige voedingsmedia. Het is voldoende dat een klein fragment van de DNA-streng van het infectieuze agens aanwezig is in het materiaal dat wordt bestudeerd.
De basis van de reactie is de mogelijkheid onder kunstmatige omstandigheden (in vitro) om de synthese van nucleïnezuurmoleculen van het infectieuze agens te creëren.
Wat is nodig voor PCR?
- Primers zijn de DNA-segmenten waaruit biosynthese of creatie begint.
- Nucleotiden of complexe verbindingen die de basis vormen van een DNA- of RNA-molecuul.
- Polymerase kettingreactie is onmogelijk zonder de aanwezigheid van polymerase, wat een enzym is dat de PCR versnelt.
Stadia van PCR-diagnostiek
Hoe wordt moleculaire diagnose uitgevoerd door PCR? De procedure is eenvoudig en neemt een korte tijd in beslag, rekening houdend met de verzameling van materiaal.
- Voordat ze met het onderzoek beginnen, nemen ze het nodige biologische materiaal in - dit is het bronchiale waswater, bloed, maaginhoud, sputum. Het type biologisch materiaal hangt af van het vermoedelijke pathogeen.
- Denaturatie of vernietiging van de primaire structuur van DNA, dat uit twee ketens bestaat. De essentie van deze fase is om de twee ketens te scheiden onder invloed van hoge temperaturen (het maximum is 98 ºC, dat niet langer duurt dan twee minuten).
- In het volgende stadium van PCR, genaamd uitgloeien, wordt de temperatuur met verschillende graden verlaagd, zodat de primer aan de DNA-streng zal binden.
- Verlenging, waarbij de synthese van de gewenste moleculen direct plaatsvindt.
Als resultaat ontvangen slechts 25-30 van dergelijke cycli het noodzakelijke aantal kopieën van het DNA van het micro-organisme, die gemakkelijk te herkennen zijn.
Vereist PCR een diagnose van tuberculose?
Het is niet mogelijk voor absoluut alle mensen met vermoedelijke tuberculose om PCR uit te voeren, omdat de methode dure apparatuur vereist. Niet alle openbare klinieken kunnen het zich veroorloven om het te kopen. Bovendien was het zo dat de gebruikelijke methoden om een infectie te diagnosticeren in de meeste gevallen ook zichzelf rechtvaardigen.
Deze omvatten:
- patiëntonderzoek, geschiedenis nemen;
- volledig onderzoek van de persoon;
- een studie met de tuberculinetest van Mantoux;
- radiografie of fluorografie;
- computer diagnostiek indien nodig;
- microbiologische onderzoeksmethoden: uitstrijk microscopie en sputum bacteriologisch onderzoek.
PCR voor tuberculose wordt in speciale gevallen uitgevoerd wanneer het moeilijk is om een diagnose te stellen of het niet mogelijk is om andere instrumentele methoden uit te voeren.
Ondanks de overvloed aan diagnostische methoden, blijft de incidentie van tuberculose toenemen. Momenteel is er niet alleen de groei, maar ook andere kenmerken:
- de ziekte komt vaak in ernstige vorm voor;
- het aantal dodelijke gevallen neemt toe;
- steeds resistenter tegen moderne chemotherapie zijn gediagnostiseerde vormen van de ziekte.
De terughoudendheid van de mensen zelf om jaarlijks routine-medische onderzoeken te ondergaan, de afwijzing van vaccinatie leidt tot de verspreiding van tuberculose. In dergelijke omstandigheden hebben we snelle, informatieve en effectieve onderzoeksmethoden nodig die toegankelijk moeten zijn voor kinderen en volwassenen. Alle bovenstaande diagnostische methoden zijn veel slechter dan PCR.
Voordelen van het diagnosticeren van tuberculose met PCR
Dit onderzoek, hoewel nieuw, heeft zichzelf goed bewezen, vooral in controversiële gevallen waarin het onmogelijk is om een diagnose te stellen om een aantal redenen.
Dankzij PCR is het veel gemakkelijker om de veroorzaker van tuberculose in het testmateriaal te detecteren.
De voordelen van PCR-diagnose zijn als volgt.
- Dit is een snelle analyse. Een klein fragment van het DNA-molecuul kan worden gebruikt om binnen enkele uren (ongeveer vijf) een diagnose te stellen, die met succes wordt gebruikt in noodsituaties, wanneer bijvoorbeeld vóór een operatie moet worden vastgesteld of iemand ziek is van tuberculose.
- PCR-analyse is toegestaan in het geval dat andere methoden niet beschikbaar of verboden zijn (voor de detectie van longtuberculose, moet u soms meerdere radiografische beelden maken, wat een grote dosis straling zal zijn).
- Met behulp van PCR wordt elke biologische omgeving onderzocht op de aanwezigheid van een pathogeen daarin. U kunt bijvoorbeeld een studie van hersenvocht uitvoeren, als er een vermoeden bestaat van tuberculeuze meningitis.
- Toegestane PCR-diagnose van infectieziekten bij kinderen, omdat de methode veilig is.
- Hiermee kunt u de ziekteverwekker in elk stadium van de ziekte identificeren.
- De hoge gevoeligheid van PCR maakt het mogelijk om Mycobacterium tuberculosis te detecteren, zelfs als er slechts een paar micro-organismen in het biologische materiaal aanwezig zijn.
- Het is goed om uit te voeren voor de diagnose van ziekte-recidief.
Immers de lees-PCR lijkt een bijna perfecte diagnostische methode, die iedereen met verdenking van tuberculose zou moeten maken. Maar er zijn ook nadelen, ze moeten in aanmerking worden genomen.
Nadelen van PCR bij de diagnose van tuberculose
In onze tijd zijn dergelijke diagnoses zeldzamer dan regelmaat. En daarvoor is er reden.
- Dit is een dure onderzoeksmethode. In veel klinieken is apparatuur voor PCR afwezig vanwege de hoge kosten, maar analyse kan nog steeds worden uitgevoerd in betaalde laboratoria.
- Direct na de behandeling kunnen dode mycobacteriën of in kleine hoeveelheden leven nog aanwezig zijn in het menselijk lichaam (het resultaat zal positief zijn tijdens PCR-diagnostiek), dus de methode zal op dit moment onbetrouwbaar zijn, het heeft geen zin om het uit te voeren.
- Mutaties van mycobacteriën resulteren in niet-effectieve PCR - een normale DNA-strengsequentie kan niet worden gesynthetiseerd.
- Het is noodzakelijk om de juiste omgeving voor de studie te kiezen, bloed wordt alleen ingenomen als het wordt vermoed besmet te zijn (sepsis), het is niet nodig om sputum te nemen als er sprake is van tuberculose van de organen van het zenuwstelsel. In dit geval kan de PCR het pathogeen niet detecteren en is de diagnose niet informatief.
Indicaties voor het detecteren van tuberculose met behulp van PCR-analyse
PCR-diagnose van tuberculose wordt het vaakst uitgevoerd in controversiële gevallen. Wanneer verwijzen artsen naar deze studie?
- Als het moeilijk is om een diagnose te stellen met behulp van de gebruikelijke beschikbare methoden, maar er was contact met een patiënt met tuberculose.
- In het geval dat een persoon niet aan een kliniek kan worden afgeleverd om routinematige routinetests voor tuberculose te ondergaan, is het gemakkelijker om hem met PCR te onderzoeken, omdat het sputum voor de test in een pot kan worden afgeleverd en de diagnose binnen een paar uur wordt bevestigd.
- Als een persoon een spoedoperatie gaat krijgen en het is dringend nodig om uit te zoeken of hij ziek is van tuberculose.
- Indien nodig, is een zwangere vrouw ook beter om te onderzoeken op tuberculose met behulp van PCR, omdat de methode veilig is.
- Op betaalde basis is iedereen die niet is gediagnosticeerd met tuberculose bevestigd met bacteriologische methoden en fluoroscopie. Dit gebeurt wanneer de laesie in de longen onmerkbaar is in het directe beeld en de persoon tijdens de bevalling van sputum voor het onderzoek de aanbevelingen voor de juiste verzameling van materiaal niet kon volgen. In dit geval maakt de persoon zich zorgen over alle symptomen die kenmerkend zijn voor longtuberculose.
- Als er twijfels zijn over de resultaten van de Mantoux-test.
- Het verdient de voorkeur een PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen te doen. De procedure is veilig, creëert geen extra blootstelling aan straling en is effectief bij het opsporen van moeilijk te diagnosticeren vormen van de ziekte.
Tijdige diagnose van tuberculose is de sleutel tot een goed voorgeschreven behandeling en het verminderen van de verspreiding van de ziekte. Vaak zijn bekende ziektedetectiemethoden niet altijd effectief. Daarom is PCR vandaag de dag een van de meest betrouwbare en veilige manieren om infectie te detecteren in de vroege stadia van zijn ontwikkeling.
PCR-analyse
PCR (polymerasekettingreactie) is veruit de snelste en meest betrouwbare methode voor het diagnosticeren van infectieziekten.
Het principe van de polymerasekettingreactiemethode werd ontwikkeld door Kary Mullis in 1983. Voor zijn ontdekking ontving K. Mullis in 1993 de Nobelprijs voor de Scheikunde.
De PCR-methode maakt het mogelijk om een significante toename in kleine concentraties van bepaalde nucleïnezuurfragmenten (DNA) in biologisch materiaal (monster) te bereiken. De methode is gebaseerd op meervoudig selectief kopiëren (amplificatie) van een bepaald gedeelte van DNA met behulp van enzymen onder kunstmatige omstandigheden.
De voordelen van de PCR-diagnostische methode als een diagnostische methode voor infectieziekten
Directe detectie van pathogenen
Veel traditionele diagnostische werkwijzen, zoals enzymimmunoassay, detecteren eiwitmerkers die de producten zijn van de vitale activiteit van infectieuze agentia, die alleen indirect bewijs van de aanwezigheid van infectie geeft. Identificatie van een specifiek DNA-gebied van een pathogeen met behulp van de PCR-methode geeft een directe indicatie van de aanwezigheid van het pathogeen.
Hoge specificiteit
De hoge specificiteit van de PCR-methode is te wijten aan het feit dat een uniek DNA-fragment wordt gedetecteerd in het onderzochte materiaal. De specificiteit wordt bepaald door de nucleotidesequentie van de primers, wat de mogelijkheid uitsluit om valse resultaten te verkrijgen, in tegenstelling tot immunologische analysemethoden, waarbij fouten in verband met kruisreagerende antigenen frequent zijn.
Hoge gevoeligheid
De PCR-methode maakt het mogelijk om zelfs enkele cellen van bacteriën of virussen te detecteren. PCR-analyse onthult de aanwezigheid van pathogenen van infectieziekten in gevallen waarin andere methoden (immunologisch, bacteriologisch, microscopisch) dit niet kunnen. De gevoeligheid van de PCR-analyse is 10-100 cellen per monster (de gevoeligheid van immunologische en microscopische tests is 103-105 cellen).
Universaliteit van de procedure voor detectie van verschillende pathogenen
Het materiaal voor de studie met PCR is het DNA van de ziekteverwekker. De methode is gebaseerd op de detectie van een DNA-fragment of RNA dat specifiek is voor een bepaald organisme. De gelijkenis van de chemische samenstelling van alle nucleïnezuren maakt het gebruik van uniforme methoden van laboratoriumonderzoek mogelijk. Dit maakt het mogelijk om verschillende pathogenen te diagnosticeren van een enkele bioassay.
Hoge analyseresultaten
Voor PCR-analyse is isolatie en kweek van de kweek van het pathogeen niet vereist, wat veel tijd kost. De uniforme methode voor het verwerken van het biomateriaal en de detectie van reactieproducten en de automatisering van het amplificatieproces maken het mogelijk om een complete analyse uit te voeren in 4-5 uur.
Het vermogen om niet alleen acute, maar ook latente infecties te diagnosticeren
De PCR-werkwijze is in het bijzonder effectief voor het diagnosticeren van moeilijk te cultiveren, niet-gecultiveerde en persistente vormen van micro-organismen die vaak voorkomen bij latente en chronische infecties, omdat deze werkwijze de moeilijkheden vermijdt die gepaard gaan met het laten groeien van dergelijke micro-organismen in het laboratorium. Het gebruik van PCR-diagnostiek is ook zeer effectief tegen pathogenen met hoge antigene variabiliteit en intracellulaire parasieten.
Hoe effectief is testen van sputum op tuberculose door PCR?
Om Koch-sticks bij mensen te identificeren, worden verschillende diagnostische methoden gebruikt. Dankzij hem kan de pathologie zelfs in het beginstadium worden gedetecteerd, wat de kansen op herstel van de patiënt vergroot. Sputum-analyse voor tuberculose is een techniek die het meest wordt gewaardeerd en die redelijk effectief is. Wat is het en hoeveel kost zo'n analyse?
Wat is de analyse van sputum door PCR?
PCR staat voor polymerasekettingreactie. Deze methode is effectief tegen infectieziekten. Om een duidelijke diagnose te stellen, hoeft u geen grote hoeveelheid biomateriaal te verzamelen en lang te wachten, zoals in het geval van sputumzaaien.
De methode is gebaseerd op het verkrijgen van DNA van deeltjes van micro-organismen. Verder zal moleculair genetisch onderzoek bepalen welk type micro-organismen het beschikbare materiaal zou moeten omvatten. Onder condities van een reageerbuis, zal een specialist bacteriemoleculen synthetiseren en binnen een paar uur de juiste conclusies trekken.
effectiviteit
Sputum-analyse voor Mycobacterium tuberculosis is effectief wanneer Koch's toverstok het ademhalingssysteem heeft geraakt. In dit geval kan de ziekte gemakkelijk worden geïdentificeerd, zelfs in de eerste uren van infectie.
Maar sputumanalyse zal geen betrouwbaar resultaat laten zien als tuberculose aanwezig is:
- botten;
- hersenen, ruggenmerg;
- zenuwstelsel;
- gewrichten, etc.
De fytotherapeut kan het type van de ziekte bepalen, rekening houdend met de huidige symptomen en op basis van de resultaten van algemene en andere analyses.
Het is ook niet geschikt voor een dergelijke methode van onderzoek in het geval dat u een controle-analyse moet uitvoeren na de therapeutische behandeling van de ziekte. Het resultaat is positief, omdat er in het lichaam in elk geval nog steeds een IBC-status aanwezig is. Het is beter om de voorkeur te geven aan een andere diagnostische procedure.
Contra-indicaties voor de methode
Als zodanig zijn er geen contra-indicaties voor sputumonderzoek voor tuberculose met behulp van PCR. Er zijn beperkingen. Zoals hierboven vermeld, is het niet nodig om het uit te voeren na de behandeling van tuberculose. De resultaten zullen niet nuttig zijn. Hier is het wenselijk om een andere diagnose te stellen.
Bovendien zijn er geen andere obstakels voor deze diagnose. Sputum kan in elke leeftijdscategorie en voor alle bijbehorende ziekten worden onderzocht. Zelfs als er geen overvloedige afgifte van sputum is, kan analyse worden uitgevoerd door slijm te nemen met behulp van bronchoscopie.
voordelen
In deze methode, de massa van plussen, deze omvatten:
- Hoge specificiteit en gevoeligheid. Alleen de veroorzaker van tuberculose wordt gedetecteerd. Er kan geen vals antwoord worden gegeven als alle nuances van de procedure in aanmerking worden genomen. Mycobacteriën worden zelfs bij hun minimumaantal gedetecteerd. Zelfs als er 10 abnormale cellen in het verzamelde materiaal zitten, wordt de infectie gedetecteerd.
- De snelheid van het krijgen van een antwoord. Hoeveel analyse is er gedaan? Na 3-5 uur kun je het resultaat krijgen. Het is niet nodig om sputumkweek te doen voor tuberculose, en dit vermindert de tijd.
- Je kunt je identificeren als een verborgen infectie en degene die zich in een acute vorm bevindt.
- Er zijn geen absolute contra-indicaties. Dit maakt het mogelijk om de procedure voor iedereen zonder uitzondering uit te voeren (zelfs voor kleine kinderen), en vooral wanneer andere methoden niet zijn opgelost.
- Met behulp van PCR-diagnostiek worden verschillende biomaterialen (urine, uitwerpselen, bloed, speeksel, hersenvocht, etc.) bestudeerd.
- De methode onthult tuberculose in de vroege stadia, in de eerste uren na infectie.
tekortkomingen
Naast de positieve kanten zijn er ook negatieve. Dit is:
- PCR-analyse is een duur "plezier". Bovendien is de apparatuur die nodig is voor de implementatie niet beschikbaar in elk medisch centrum. In klinieken is het zelden aanwezig, omdat de waarde ervan ook groot is. Als we het hebben over privéklinieken, dan kun je dit soort diagnose wel vinden. Sta jezelf toe, helaas, kan niet iedereen.
- Het vertoont een vals-positief resultaat bij mensen die onlangs een behandeling met tuberculose hebben ondergaan.
- Als MBC is gemuteerd, kan de methode ook valse resultaten opleveren.
- Als het materiaal niet goed wordt ingezameld of als de specialist die het onderzoek doet onvoldoende kwalificatieniveau heeft, is een storing ook mogelijk. In sommige gevallen moet de procedure meerdere keren worden herhaald en telkens wanneer de betaling wordt herhaald.
Voorbereiding voor analyse
Om ervoor te zorgen dat het materiaal van hoge kwaliteit is, moet het correct worden geassembleerd en op de juiste manier worden voorbereid.
Er zijn bepaalde regels voor het verzamelen van sputum voor tuberculose. Het actie-algoritme is als volgt:
- Zelfs aan de vooravond moet iemand 's avonds een slijmoplossend drankje drinken (als het sputum slecht weg beweegt). Zelfs als het niet zou helpen, moet de inhalatie worden uitgevoerd op basis van een medicinaal verdunnend en slijmoplossend medicijn. Bij afwezigheid van sputum is de patiënt het doelwit voor bronchoscopie. Het is tijdens deze procedure dat het materiaal voor de studie wordt genomen.
- Koop vooraf een speciale container. Het is steriel en luchtdicht, dus niets extra's kan daar worden geplaatst, maar ook van tevoren worden geopend.
- De kamer waar het sputum wordt verzameld, moet goed worden geventileerd. Het is noodzakelijk om ramen, deuren te openen, de kap aan te zetten. Een andere goede optie is om wat frisse lucht te krijgen (bijvoorbeeld naar het balkon of naar de binnenplaats).
- Vlak voor de procedure moet je iedereen waarschuwen zodat niemand de kamer binnenkomt waar alles zal gebeuren. Er mogen geen extra microdeeltjes in het biomateriaal zitten - dit is belangrijk.
- Eten vóór het plukken wordt niet aanbevolen.
- Mond en keel spoelen.
- Speeksel wordt uitgespuugd. De capaciteit zou minimaal moeten zijn.
- Door hoest haalt een persoon het slijm eruit en spuugt het in een voorbereide container. Sluit na de procedure het deksel goed en breng het monster naar het laboratorium.
Sputum verzamelen moet de arts vertellen. Als de patiënt het niet alleen durft, komen hulpverleners te hulp. Tijdens de manipulatie zetten ze een speciaal beschermend masker op. Verzamel sputum in een speciale ruimte, waar geen vreemden voor kunnen komen. Als de patiënt niet naar de kliniek kan komen, komt de specialist bij hem thuis en helpt bij het verzamelen van slijm.
Als bronchoscopie wordt uitgevoerd, wordt de patiënt met een apparaat in de luchtpijp geïnjecteerd - een bronchoscoop. Het is met zijn hulp dat het materiaal wordt genomen.
Voor betrouwbaarheid is het raadzaam om de analyse drie keer door te geven, namelijk:
- in de ochtend op een lege maag;
- na de eerste keer na 4-5 uur;
- 24 uur na de eerste studie en ook vóór de maaltijd.
Hoe wordt deze analyse uitgevoerd?
Het behalen van een sputumtest voor tuberculose is slechts een deel van het werk. Belangrijkste vooruit. Veel hangt af van hoe een specialist is voorbereid.
Het verloop van de studie is als volgt:
- De specialist gaat verder met de vernietiging van de primaire structuur van DNA (denaturatie). Er zijn hier twee kettingen. Bij hoge temperaturen zijn ze gescheiden.
- In de volgende fase wordt de temperatuur verlaagd (uitgegloeid). Dit is nodig voor de verbinding van de DNA-streng met de primer.
- De derde fase is verlenging. Hier worden de nodige moleculen gesynthetiseerd.
Decoderingsresultaten
Mycobacterium tuberculosis in sputum door PCR kan worden gedetecteerd of niet. Een positief resultaat is gebaseerd op het feit dat er DNA van Koch-sticks aanwezig is in het biomateriaal. Dit suggereert dat de persoon is geïnfecteerd. Met een negatieve - 98% van het feit dat het onderwerp niet is geïnfecteerd.
Indicatoren kunnen worden beoordeeld op:
- welke fase van pathologie (latent of actief);
- hoeveel het lichaam is aangetast;
- of de gekozen behandeling in een bepaald geval effectief is.
Houd er rekening mee dat niets grondig is. Daarom kan er een vals-positief of fout-negatief resultaat zijn. Om de juistheid te garanderen, worden andere diagnostische procedures aanbevolen of PCR wordt tweemaal (driemaal) uitgevoerd.
Kostenanalyse in verschillende centra
Je kunt sputum geven voor PCR in verschillende klinieken. Laten we voorbeelden geven van verschillende populaire centra in Moskou met prijsbeleid.
PCR-sputumanalyse voor tuberculose
Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis), DNA (PCR), sputum van hoge kwaliteit
Speciale studievoorbereiding is niet vereist.
Testmateriaal: Sputum
Tuberculose (van Latijns tuberculum - "tubercle") is een specifieke infectieziekte van mens en dier, die voornamelijk wordt overgedragen door druppeltjes in de lucht. Het risico op infectie neemt toe als gevolg van een afname van de immuniteit veroorzaakt door HIV / AIDS, chronische nierziekte, diabetes, zwangerschap, veroudering, orgaantransplantatie en de bijbehorende immuunonderdrukkende geneesmiddelen. Bovendien zijn kinderen jonger dan 5 jaar na de tuberculinatie beurt en degenen die contact hebben met patiënten met tuberculose zijn vatbaarder voor de ziekte. De meest kwetsbare groepen zijn daklozen, gevangenen, drugsverslaafden en ouderen.
Tuberculose van mensen en dieren veroorzaakt verschillende nauw verwante soorten mycobacteriën. De meest voorkomende veroorzaker van tuberculose bij mensen is de soort Mycobacterium tuberculosis.
Na het identificeren van de veroorzaker van tuberculose, is het noodzakelijk om een onderzoek uit te voeren naar de gevoeligheid van gedetecteerde mycobacteriën voor geneesmiddelen tegen tuberculose. Deze procedure is erg belangrijk voor de benoeming van een adequate behandeling van de ziekte.
Deze analyse maakt het mogelijk om de aanwezigheid van het genetische materiaal (DNA) van mycobacterium tuberculosis in sputum te bepalen. De analyse helpt bij de diagnose van longtuberculose.
De PCR-methode is een polymerase-kettingreactie, die het mogelijk maakt de aanwezigheid van het genetische materiaal in het biologische materiaal te identificeren.
Meer informatie over de PCR-methode - de variëteiten, voordelen en toepassingen in de medische diagnostiek.
Referentiewaarden - Norm
(Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis), DNA (PCR), kwalitatief, sputum)
Informatie over de referentiewaarden van de indicatoren, evenals de samenstelling van de indicatoren die in de analyse zijn opgenomen, kunnen enigszins verschillen, afhankelijk van het laboratorium!
Normaal gesproken is mycobacterium tuberculosis-DNA afwezig in het sputum.
341MK, Mycobacterium tuberculosis, DNA-bepaling (Mycobacterium tuberculosis, DNA) in sputum, wasbeurten, lavage-vloeistof
Bepaling van DNA van tuberculosepathogenen: Mycobacteriumcomplex: M. tuberculosis, M. bovis, M. bovis BCG, M. microti, M. africanum in sputum, wasbeurten uit de bronchiën, spoelvloeistof door PCR-detectie met reële modus van tijd.
Tuberculose (van het Latijn Tuberculum - tuberkel) - een veel voorkomende, sociaal afhankelijke menselijke ziekte. Ze zijn ziek en beesten. De veroorzaker van tuberculose werd ontdekt door R. Koch in 1882. Dit zijn zuurbestendige aërobe bacteriën (74 soorten) van het geslacht mycobacterium, wijd verspreid in grond, water en bij dieren. Bij mensen is de meest voorkomende pathogeen Mycobacterium tuberculosis. De tweede meest voorkomende is Mycobacterium bovis. Beide soorten zijn zeer resistent tegen vele omgevingsfactoren en blijven zeer lang levensvatbaar in het lichaam en kunnen vele jaren na infectie ziekte veroorzaken. Het is erg belangrijk dat mycobacterium tuberculosis zogenaamde L-vormen kan vormen. Als ze in het lichaam blijven, creëren ze een immuniteit tegen tuberculose. Langdurig kan tuberculose latent optreden en kan het door toeval worden ontdekt, hoewel symptomen zoals zwakte, vermoeidheid, lichte koorts, nachtelijk zweten en bloedarmoede en leukopenie zich vaak manifesteren.
Momenteel, ondanks alle prestaties van antimicrobiële therapie, bedreigt tuberculose de toekomst van de natie. Daarom zijn alle diagnostische methoden, vooral de latente vormen ervan, uiterst belangrijk.
Er zijn veel methoden voor laboratoriumdiagnostiek van tuberculose: uitstrijkmicroscopie (meestal gebruikt voor dit doel sputum), de klassieke kweekmethode, ELISA. Ze hebben allemaal voordelen, maar ook bepaalde nadelen, met name de detectie van mycobacteriën alleen in het geval van een voldoende aantal ervan.
In de afgelopen jaren is polymerasekettingreactie (PCR) gebruikt voor diagnose. De hoge gevoeligheid maakt het mogelijk om afzonderlijke cellen en zelfs DNA-fragmenten in het onderzochte materiaal te detecteren. De methode elimineert kruisreacties en de specificiteit bereikt 100%. PCR maakt differentiatie mogelijk van beperkte en verspreide vormen van tuberculose, vooral bij kinderen, zelfs met negatieve resultaten van microbiologische studies.
Analytische indicatoren:
- detecteerbare fragmentspecifieke secties van mycobacterieel DNA;
- bepalingsspecificiteit - 100%;
- detectiegevoeligheid - 100 kopieën van mycobacterieel DNA in het monster.
- Bronchitis, bronchopneumonie gepaard met een sterke toename van de basale lymfeklieren.
- Hemoptysis op de achtergrond van een veelvoorkomende asthenische aandoening.
- Acute ontsteking van de bovenste en onderste luchtwegen, vergezeld van een productieve hoest in de aanwezigheid van langdurig contact met een patiënt met tuberculose in de geschiedenis
Interpretatie van onderzoeksresultaten bevat informatie voor de behandelende arts en is geen diagnose. De informatie in dit gedeelte kan niet worden gebruikt voor zelfdiagnose en zelfbehandeling. Een nauwkeurige diagnose wordt gesteld door de arts, waarbij zowel de resultaten van dit onderzoek als de nodige informatie uit andere bronnen worden gebruikt: anamnese, resultaten van andere onderzoeken, enz.
Testkwaliteit. Het resultaat wordt gegeven in termen van "gedetecteerd" of "niet gedetecteerd".
"Gedetecteerd": Mycobacterium-specifieke DNA-fragmenten specifiek voor mycobacteriën werden gevonden in het te analyseren monster.
"Niet gedetecteerd": in het geanalyseerde monster werden mycobacterium-specifieke DNA-fragmenten of de concentratie van het pathogeen in het monster niet onder de gevoeligheidsgrens van de test gevonden.
Let op, dat de timing van PCR-onderzoeken kan worden verhoogd bij het uitvoeren van bevestigende tests.
- Makarevich A.E. Luchtwegaandoeningen - M. Higher School, 2000. - 368 p.
- Jacobs D. et al. Laboratorium test handboek / Lexi-Comp./2002 - pp. 828 - 829.
- Algemene informatie
* De aangegeven periode omvat niet de dag waarop het biomateriaal wordt ingenomen
Sputum, swabs, lavage-vloeistof
Realtime PCR-detectie.
In dit gedeelte kunt u zien hoeveel het kost om deze studie in uw stad te voltooien, zie de beschrijving van de test en de tabel met interpretatie van de resultaten. Kiezen waar de analyse van "Mycobacterium tuberculosis, DNA-bepaling (Mycobacterium tuberculosis, DNA) in sputum, wasbeurten, lavage-vloeistof" in Moskou en andere Russische steden moet worden doorgegeven Regionale medische kantoren kunnen variëren.
Methoden voor het testen van sputum voor tuberculose
Sputum-analyse voor tuberculose is opgenomen in de reeks diagnostische maatregelen die nodig zijn om de diagnose te identificeren en te verduidelijken. Het sputumgehalte helpt een goed behandelingsregime te maken.
Hoe een sputumtest voor tuberculose te halen
Artsen hebben regels ontwikkeld voor het maken van de analyse. Speeksel wordt 's ochtends verzameld voordat de persoon heeft ontbeten. Eerst voert de patiënt hygiëneprocedures uit:
- reiniging tandglazuur;
- grondig spoelen met schoon water uit de mondholte en keelholte.
Dan begint de onmiddellijke levering van materiaal voor analyse. Hoe slaag ik in een sputumtest? Vereisten voor de procedure:
- Voorbereiding begint van tevoren, 's avonds. De patiënt wordt aangemoedigd om speciale medicijnen te nemen die de pulmonale secretie natuurlijker maken. Dit zijn slijmoplossend en verdunnende verbindingen. Als dergelijke procedures niet helpen, voer dan inhalatie uit met een farmaceutische samenstelling voor slijm.
- Containers voorbereiden op sputum. Mucus moet worden verzameld in gesteriliseerde schalen, strak sluiten, strak.
- Vóór de bevalling ophoesten en in een bak spugen. Het speeksel moet niet groot zijn, het heeft sputum van het strottenhoofd nodig. Bacteriën van de mondholte zijn vreemd in de analyse.
- Verzamel speeksel in een kamer met uitstekende ventilatie. De analyse wordt uitgevoerd door de spiegel te openen en de kap te laten lopen. Het is raadzaam om de ramen te openen of naar buiten te gaan.
Tijdens de procedure in de kamer is het verboden om binnen te komen. Buitenstaanders kunnen bijdragen aan de microflora van het kantoor, en dus aan het sputum, pathologische formaties. Medische hulpverleners ontvangen een analyse in een speciaal masker (gasmasker).
Sputum-analyse voor transcriptie van tuberculose
Decoderen begint met kijken naar het uiterlijk van het slijm. Pathologie karakteriseert de verandering in kleur - het wordt donker, met zichtbare toevoegingen van bloed. Kleur is niet de hoofdindicator. Sputum wordt donker door het drinken van rode wijn, koffiepassie. Sommige medicijnen en gekleurde dranken veranderen het uiterlijk van slijm.
Het verzamelde materiaal wordt ontcijferd door twee indicatoren, dat wil zeggen, artsen krijgen twee resultaten:
Positief antwoord
Analyse van het resulterende sputum bevestigt de aanwezigheid van de ziekte in het lichaam. Welke dit bevestigt:
- vreemde materie of onbekende insluitsels;
- de aanwezigheid van mucusstolsels;
- zichtbare strepen;
- onaangename purulente of infectieuze geur;
- pus.
Macroscopische onderzoeksmethode biedt andere gegevens:
- fibrineuze convoluties;
- Koch lens wand formaties;
- producten van ontbinding decompositie van bacteriële stoffen;
- resten van het pathologische proces in het longweefsel.
Een positief resultaat onthult een verhoogde hoeveelheid eiwitverbindingen. Het bereikt 100-120 g / l.
Een andere microscopische methode maakt het mogelijk om andere gevaarlijke elementen te identificeren:
- alveolaire macrofagen;
- overschat samenstelling van leukocyten;
- hoge snelheid van lymfocyten.
Bij tuberculose probeert iemand vaak uit zijn mond te spuwen. Hemoptys verhoogt de vorming van rode bloedcellen. De hoeveelheid speeksel in de mond is zodanig dat een persoon het niet kan inslikken zonder het te merken. Het is meer dan in een gezonde staat.
Negatief antwoord
De studie toont aan dat het aantal leukocyten klein is, overeenkomt met de norm. Microbacteriën worden ook niet gedetecteerd. Als de patiënt zich niet gezond voelt, zal de specialist een aanvullend onderzoek voorschrijven. Het is mogelijk dat de ziekte geassocieerd is met longziekte. Typen en methoden voor aanvullende diagnostiek zijn afhankelijk van de symptomen en de conditie van de patiënt.
Hoe is de studie van slijm
Tuberculose is een gevaarlijk pathologisch effect op longweefsel, hun desintegratie wordt waargenomen. De analyse wordt op verschillende manieren uitgevoerd. De meest voorkomende - ELISA (immunoassay). De essentie van de methode:
- Antilichamen worden toegevoegd aan de oplossing waarin een deel van het sputum is geplaatst.
- Controleer de concentratie van antigenen, vergeleken met de norm van een gezond lichaam.
- Bepaal de activiteit van de pathologische omgeving.
- Gediagnosticeerd.
De tweede versie van het laboratoriumonderzoek is WASTES. Neem voor de methode speciale medische apparatuur. De essentie van hardware-onderzoek:
- In de sputum geïnjecteerde micro-omgeving voor het beoogde type infectie.
- Het apparaat begint te groeien bij bepaalde temperatuurstammen van bacteriën.
- Koolstofdioxide wordt geproduceerd in het proces en sensoren halen het op.
- Het gas combineert met de kleurstof.
- Maak op de fluorescentie-index conclusies over het type ziekte.
De eenvoudigste manier is cultureel. Stuifmeel gezaaid in een speciale omgeving. De arts onderzoekt de soorten kolonies van microbiële formaties. De methode is het langst, maar stelt u in staat om de diagnose te bewijzen. Het wordt zeer zelden gebruikt, juist vanwege een lange periode van tijd, wat niet altijd geschikt is voor de patiënt.
Analyse van sputum pcr voor tuberculose
PCR is een afkorting van de medische term polymerasekettingreactie. Diagnostiek is een van de nieuwste ontwikkelingen van wetenschappers. Het werd geopend in 1983, het belang van ontdekking wordt gewaardeerd in de wereld, de wetenschapper ontving de hoogste erkenning - de Nobelprijs.
De methode is gebaseerd op het gebruik van genetische manipulatie. Zijn veelzijdigheid in de behoefte aan een kleine hoeveelheid materiaal voor een nauwkeurige diagnose. Identificatie van infectie met tuberculose is echt in de vroege uren van infectie, zonder te wachten op de ontwikkeling van de ziekte.
De essentie van de methode die polymerase is:
- een patiënt neemt een fragment van DNA-deeltjes;
- biologische synthese van het materiaal uitvoeren;
- bepaald door de klasse van micro-organismen.
Het proces is technologisch complex, het gaat om moleculair genetisch onderzoek. PCR voor tuberculose duurt letterlijk een paar uur. De tijd die nodig is voor andere methoden kan niet met snelheid worden vergeleken. Na het passeren van de analyse wacht de patiënt op de detectie van de veroorzaker. Het proces dat ten grondslag ligt aan alleen een specialist kan begrijpen. Een gewoon persoon begrijpt de fijne kneepjes van de methode niet.
Hoe is de diagnose van tuberculose tests:
- Neem het nodige materiaal voor analyse. Wat zou het kunnen zijn: bloed, maag, sputum, water, gewassen met bronchiën.
- Het type materiaal wordt gekozen afhankelijk van het type mogelijke pathogene infectie.
- De volgende stap is het bestuderen van de ketenverbinding. Twee kettingen worden onderworpen aan hoge temperaturen tot 98 graden. Het stadium wordt denaturatie genoemd (vernietiging van de structurele DNA-keten). Temperatuur belichtingstijd - tot 2 minuten.
- De volgende fase is gloeien. De temperatuur wordt verlaagd, de primer kan verbinding maken met de DNA-streng.
- Als gevolg hiervan treedt verlenging op - de synthese van moleculen die nodig zijn voor het proces.
Voor een dergelijke analyse is speciale apparatuur vereist. Het is duur, dus het is niet beschikbaar in een gezondheidszorginstelling. PCR wordt uitgevoerd in moeilijke gevallen, wanneer er geen exact resultaat is van conventionele diagnostische methoden, is het onmogelijk om instrumentele methoden uit te voeren voor het controleren van de toestand van de patiënt.
De voordelen van PCR-technologie:
- De snelheid van het behalen van het resultaat. Ongeveer 5 uur een arts heeft nauwkeurige gegevens. Met deze snelheid kunt u de patiënt in nood helpen. Vaker is het de pre-operatieve periode.
- Toegestaan als andere methoden niet kunnen worden gebruikt. De frequente herhaling van röntgenstralen leidt bijvoorbeeld tot straling. PCR is niet gevaarlijk voor de patiënt.
- Je kunt elke biologische omgeving verkennen. Zelfs complexe vormen van tuberculose worden geïdentificeerd.
- De methode is veilig, daarom geschikt voor kinderen.
- Infectie wordt in elk stadium gedetecteerd.
- PCR laat niet toe om zelfs een klein aantal bacteriële micro-formaties te verbergen.
- Geschikt om mogelijke herhaling van tuberculose te controleren.
Hoeveel doet sputum-analyse voor tuberculose
Er worden meer dan één keer monsters genomen. Herhalingen sluiten de mogelijkheid van fouten uit of het verkrijgen van materiaal van slechte kwaliteit dat de werkelijke positie en toestand van de patiënt niet weerspiegelt. Hoeveel keer om sputum te verzamelen, vertel het de behandelende arts. De beste optie is drie keer per dag. Soms zijn extra monsters nodig. Gedurende welke periode verzamelen zij:
- Voor het eten in de ochtend.
- 3-4 uur na de eerste test.
- Op de tweede dag, ook voor de maaltijd.
Tuberculose is een gevaarlijke ziekte die het lichaam van een persoon kan aantasten. Er zijn veel infectiesituaties. Probeer niet te wachten op heldere symptomen, met een verdenking van de mogelijkheid van infectie. Het moet worden getest, onderzocht en op tijd worden gegeven om met de behandeling te beginnen.
PCR-diagnose van tuberculose
Tuberculose is een specifieke infectie, de focus ervan kan jarenlang in menselijke weefsels liggen en vervolgens gedurende enkele maanden worden verspreid. Dit is een chronische ziekte waarvan de optimale behandelingsregimes moeilijk te selecteren zijn. Een van de redenen hiervoor is de late diagnose, wanneer mycobacteriën, terwijl ze zich in het menselijk lichaam bevinden, al aan veel medicijnen zijn aangepast.
Welke moderne diagnosemethoden bestaan er? PCR-diagnose - wat is het? Hoe wordt dit onderzoek gedaan? In welke gevallen wordt met deze methode tuberculose gediagnosticeerd en wat is de essentie ervan?
Wat is PCR-diagnostiek
Dit is een van de modernste methoden om niet alleen ziekten te diagnosticeren, maar ook om biologisch materiaal te detecteren. PCR-diagnostiek is relatief recent uitgevonden. Ongeveer 30 jaar geleden, in 1983, stelde een Amerikaanse biochemicus, Carey Banks Mullis, een complex herstelplan voor het biologische materiaal van micro-organismen voor in een kort segment. Dankzij zijn ontdekking kreeg de wetenschapper de hoogste onderscheiding - de Nobelprijs.
Wat is het - PCR-diagnose van infecties? Polymerase-kettingreactie (PCR) is een diagnose van de detectie van virale ziekten, gebaseerd op werkwijzen van genetische manipulatie. Het wordt veel gebruikt in de medische microbiologie, immunologie en virologie. De methode is universeel en helpt om een diagnose te stellen met een kleine hoeveelheid materiaal. Een infectie kan letterlijk worden gedetecteerd in de eerste uren van infectie ermee, lang voordat de eerste symptomen van de ziekte verschijnen.
De methode bestaat erin om uit het materiaal van een zieke persoon niet de ziekteverwekker zelf te halen, maar fragmenten van het genoom (DNA-deeltjes), de biosynthese ervan met daaropvolgende bepaling tot welke klasse van micro-organismen het verkregen genetische materiaal behoort door middel van moleculair genetische methoden.
Ondanks het feit dat dit een complex proces is, kost het veel minder tijd dan veel biologische methoden voor het detecteren van infectieuze agentia. Binnen slechts een paar uur kan een micro-organisme worden gedetecteerd met behulp van PCR. Om dit te doen, is het niet nodig om het te isoleren van de omgeving (bloed, hersenvocht, sputum) en het te laten groeien op kunstmatige voedingsmedia. Het is voldoende dat een klein fragment van de DNA-streng van het infectieuze agens aanwezig is in het materiaal dat wordt bestudeerd.
De basis van de reactie is de mogelijkheid onder kunstmatige omstandigheden (in vitro) om de synthese van nucleïnezuurmoleculen van het infectieuze agens te creëren.
Wat is nodig voor PCR?
- Primers zijn de DNA-segmenten waaruit biosynthese of creatie begint.
- Nucleotiden of complexe verbindingen die de basis vormen van een DNA- of RNA-molecuul.
- Polymerase kettingreactie is onmogelijk zonder de aanwezigheid van polymerase, wat een enzym is dat de PCR versnelt.
Stadia van PCR-diagnostiek
Hoe wordt moleculaire diagnose uitgevoerd door PCR? De procedure is eenvoudig en neemt een korte tijd in beslag, rekening houdend met de verzameling van materiaal.
- Voordat ze met het onderzoek beginnen, nemen ze het nodige biologische materiaal in - dit is het bronchiale waswater, bloed, maaginhoud, sputum. Het type biologisch materiaal hangt af van het vermoedelijke pathogeen.
- Denaturatie of vernietiging van de primaire structuur van DNA, dat uit twee ketens bestaat. De essentie van deze fase is om de twee ketens te scheiden onder invloed van hoge temperaturen (het maximum is 98 ºC, dat niet langer duurt dan twee minuten).
- In het volgende stadium van PCR, genaamd uitgloeien, wordt de temperatuur met verschillende graden verlaagd, zodat de primer aan de DNA-streng zal binden.
- Verlenging, waarbij de synthese van de gewenste moleculen direct plaatsvindt.
Als resultaat ontvangen slechts 25-30 van dergelijke cycli het noodzakelijke aantal kopieën van het DNA van het micro-organisme, die gemakkelijk te herkennen zijn.
Vereist PCR een diagnose van tuberculose?
Het is niet mogelijk voor absoluut alle mensen met vermoedelijke tuberculose om PCR uit te voeren, omdat de methode dure apparatuur vereist. Niet alle openbare klinieken kunnen het zich veroorloven om het te kopen. Bovendien was het zo dat de gebruikelijke methoden om een infectie te diagnosticeren in de meeste gevallen ook zichzelf rechtvaardigen.
Deze omvatten:
- patiëntonderzoek, geschiedenis nemen;
- volledig onderzoek van de persoon;
- een studie met de tuberculinetest van Mantoux;
- radiografie of fluorografie;
- computer diagnostiek indien nodig;
- microbiologische onderzoeksmethoden: uitstrijk microscopie en sputum bacteriologisch onderzoek.
PCR voor tuberculose wordt in speciale gevallen uitgevoerd wanneer het moeilijk is om een diagnose te stellen of het niet mogelijk is om andere instrumentele methoden uit te voeren.
Ondanks de overvloed aan diagnostische methoden, blijft de incidentie van tuberculose toenemen. Momenteel is er niet alleen de groei, maar ook andere kenmerken:
- de ziekte komt vaak in ernstige vorm voor;
- het aantal dodelijke gevallen neemt toe;
- steeds resistenter tegen moderne chemotherapie zijn gediagnostiseerde vormen van de ziekte.
De terughoudendheid van de mensen zelf om jaarlijks routine-medische onderzoeken te ondergaan, de afwijzing van vaccinatie leidt tot de verspreiding van tuberculose. In dergelijke omstandigheden hebben we snelle, informatieve en effectieve onderzoeksmethoden nodig die toegankelijk moeten zijn voor kinderen en volwassenen. Alle bovenstaande diagnostische methoden zijn veel slechter dan PCR.
Voordelen van het diagnosticeren van tuberculose met PCR
Dit onderzoek, hoewel nieuw, heeft zichzelf goed bewezen, vooral in controversiële gevallen waarin het onmogelijk is om een diagnose te stellen om een aantal redenen.
Dankzij PCR is het veel gemakkelijker om de veroorzaker van tuberculose in het testmateriaal te detecteren.
De voordelen van PCR-diagnose zijn als volgt.
- Dit is een snelle analyse. Een klein fragment van het DNA-molecuul kan worden gebruikt om binnen enkele uren (ongeveer vijf) een diagnose te stellen, die met succes wordt gebruikt in noodsituaties, wanneer bijvoorbeeld vóór een operatie moet worden vastgesteld of iemand ziek is van tuberculose.
- PCR-analyse is toegestaan in het geval dat andere methoden niet beschikbaar of verboden zijn (voor de detectie van longtuberculose, moet u soms meerdere radiografische beelden maken, wat een grote dosis straling zal zijn).
- Met behulp van PCR wordt elke biologische omgeving onderzocht op de aanwezigheid van een pathogeen daarin. U kunt bijvoorbeeld een studie van hersenvocht uitvoeren, als er een vermoeden bestaat van tuberculeuze meningitis.
- Toegestane PCR-diagnose van infectieziekten bij kinderen, omdat de methode veilig is.
- Hiermee kunt u de ziekteverwekker in elk stadium van de ziekte identificeren.
- De hoge gevoeligheid van PCR maakt het mogelijk om Mycobacterium tuberculosis te detecteren, zelfs als er slechts een paar micro-organismen in het biologische materiaal aanwezig zijn.
- Het is goed om uit te voeren voor de diagnose van ziekte-recidief.
Immers de lees-PCR lijkt een bijna perfecte diagnostische methode, die iedereen met verdenking van tuberculose zou moeten maken. Maar er zijn ook nadelen, ze moeten in aanmerking worden genomen.
Nadelen van PCR bij de diagnose van tuberculose
In onze tijd zijn dergelijke diagnoses zeldzamer dan regelmaat. En daarvoor is er reden.
- Dit is een dure onderzoeksmethode. In veel klinieken is apparatuur voor PCR afwezig vanwege de hoge kosten, maar analyse kan nog steeds worden uitgevoerd in betaalde laboratoria.
- Direct na de behandeling kunnen dode mycobacteriën of in kleine hoeveelheden leven nog aanwezig zijn in het menselijk lichaam (het resultaat zal positief zijn tijdens PCR-diagnostiek), dus de methode zal op dit moment onbetrouwbaar zijn, het heeft geen zin om het uit te voeren.
- Mutaties van mycobacteriën resulteren in niet-effectieve PCR - een normale DNA-strengsequentie kan niet worden gesynthetiseerd.
- Het is noodzakelijk om de juiste omgeving voor de studie te kiezen, bloed wordt alleen ingenomen als het wordt vermoed besmet te zijn (sepsis), het is niet nodig om sputum te nemen als er sprake is van tuberculose van de organen van het zenuwstelsel. In dit geval kan de PCR het pathogeen niet detecteren en is de diagnose niet informatief.
Indicaties voor het detecteren van tuberculose met behulp van PCR-analyse
PCR-diagnose van tuberculose wordt het vaakst uitgevoerd in controversiële gevallen. Wanneer verwijzen artsen naar deze studie?
- Als het moeilijk is om een diagnose te stellen met behulp van de gebruikelijke beschikbare methoden, maar er was contact met een patiënt met tuberculose.
- In het geval dat een persoon niet aan een kliniek kan worden afgeleverd om routinematige routinetests voor tuberculose te ondergaan, is het gemakkelijker om hem met PCR te onderzoeken, omdat het sputum voor de test in een pot kan worden afgeleverd en de diagnose binnen een paar uur wordt bevestigd.
- Als een persoon een spoedoperatie gaat krijgen en het is dringend nodig om uit te zoeken of hij ziek is van tuberculose.
- Indien nodig, is een zwangere vrouw ook beter om te onderzoeken op tuberculose met behulp van PCR, omdat de methode veilig is.
- Op betaalde basis is iedereen die niet is gediagnosticeerd met tuberculose bevestigd met bacteriologische methoden en fluoroscopie. Dit gebeurt wanneer de laesie in de longen onmerkbaar is in het directe beeld en de persoon tijdens de bevalling van sputum voor het onderzoek de aanbevelingen voor de juiste verzameling van materiaal niet kon volgen. In dit geval maakt de persoon zich zorgen over alle symptomen die kenmerkend zijn voor longtuberculose.
- Als er twijfels zijn over de resultaten van de Mantoux-test.
- Het verdient de voorkeur een PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen te doen. De procedure is veilig, creëert geen extra blootstelling aan straling en is effectief bij het opsporen van moeilijk te diagnosticeren vormen van de ziekte.
Tijdige diagnose van tuberculose is de sleutel tot een goed voorgeschreven behandeling en het verminderen van de verspreiding van de ziekte. Vaak zijn bekende ziektedetectiemethoden niet altijd effectief. Daarom is PCR vandaag de dag een van de meest betrouwbare en veilige manieren om infectie te detecteren in de vroege stadia van zijn ontwikkeling.
Mycobacterium tuberculosis, DNA [real-time PCR]
Onderzoek naar het veroorzakende agens van tuberculose (Mycobacterium tuberculosis), waarbij de werkwijze Real-time PCR (RT-PCR) wordt bepaald door het genetisch materiaal (DNA) in het monster Mycobacterium biomateriaal te identificeren.
Russische synoniemen
Tuberculose, Mycobacterium tuberculosis, Koch-stokken.
Engelse synoniemen
Tuberculose, tuberkelbacillus, Koch's bacillus.
Onderzoek methode
Realtime polymerasekettingreactie.
Welk biomateriaal kan worden gebruikt voor onderzoek?
Veneus bloed, biopsie, endometrium cellen, cerebrospinale vloeistof, urogenitale wattenstaafje (geheime prostaat), sputum, pleurale vloeistof, een eerste portie ochtendurine, ejaculaat.
Hoe zich voor te bereiden op de studie?
Geen training vereist.
Algemene informatie over het onderzoek
Tuberculose (lat tuberculum -. «Bump») - infectie van mensen en dieren, voornamelijk overgedragen door druppeltjes in de lucht. Het risico van infectie verhoogt de onderdrukking van het immuunsysteem veroorzaakt door HIV / AIDS, diabetes, nierziekten, orgaantransplantatie en het gebruik van immunosuppressieve therapie, zwangerschap, veroudering. Daarnaast is het meest kwetsbaar zijn voor het, degenen die met tbc-patiënten en kinderen contact tot 5 jaar na de bocht tuberculine test. De meest kwetsbare groepen zijn de daklozen, gevangenen, migranten uit landen met een hoge incidentie van tuberculose, drugsgebruikers, evenals de ouderen.
Voor dit onderzoek gebruikte testsysteem gebaseerd op de identificatie van genomisch DNA van Mycobacterium tuberculosis door middel van polymerase ketenreactie (PCR) in echttijd (real-time PCR). In de moderne diagnostiek is het een van de snelste, meest veelzijdige en uiterst gevoelige methoden.
Standaardmethoden voor de detectie van mycobacterium tuberculosis zijn gebaseerd op de kweek van pathogene micro-organismen in een voedingsmedium. Moeilijkheden geassocieerd met lage groeisnelheid van kolonies van Mycobacterium tuberculosis - moeten worden verwacht tot 1,5 maand na inname van het materiaal.
Moleculaire biologische methoden gebaseerd op de detectie van het mycobacterium tuberculosis genetisch materiaal hebben een hoge gevoeligheid en specificiteit. Hun belangrijkste voordeel is de hoge snelheid van het behalen van resultaten. Door real-time PCR te gebruiken, kunt u de veroorzaker van tuberculose identificeren op de dag van ontvangst van het klinische monster.
Bacteremie (mycobacterium dat de bloedbaan van de patiënt binnendringt) kan voorkomen in de vroege stadia van tuberculose-infectie, evenals in de ontwikkeling van gegeneraliseerde of extrapulmonale tuberculose. Het is gevaarlijk omdat de immuunrespons op bacteriën sepsis en septische shock zal veroorzaken, wat gepaard gaat met de dood. Het risico op gegeneraliseerde tuberculose is het hoogst bij patiënten met hiv in de latere stadia, onder degenen die de antituberculosetherapie hebben onderbroken, en ook bij diegenen die niet tijdig medische hulp zochten voor het optreden van symptomen van tuberculose.
Diagnose van tuberculose bij HIV-geïnfecteerde mensen is moeilijk vanwege de immunosuppressieve toestand van het lichaam, die zich vaak manifesteert in vals-negatieve resultaten van tuberculinereacties en microbiologische tests. In dit opzicht is het testen van Mycobacterium tuberculosis door middel van PCR in real-time van groot belang.
Waar wordt onderzoek voor gebruikt?
- Voor de diagnose van longtuberculose (in het bijzonder het gegeneraliseerd en extrapulmonaal, geassocieerd met bacteriëmie, vormen), en het bewaken van de behandeling ervan.
Wanneer staat een studie gepland?
- Bij vermoeden van extrapulmonale tuberculose.
- Met symptomen van bacteriëmie op de achtergrond van een tuberculose-infectie: verhoogde lichaamstemperatuur, zweten, enz. (Met een klein aantal bacteriën in het bloed kan bacteriëmie asymptomatisch zijn).
- Als de patiënt langdurig in contact is geweest met een patiënt met tuberculose.
- Met een abnormale reactie op de tuberculinatie bij kinderen.
- Wanneer een patiënt een HIV-infectie heeft.
Wat betekenen de resultaten?
Referentiewaarden: negatief.
- De aanwezigheid van het pathogeen in het bestudeerde biomateriaal. Het gebeurt meestal met actieve tuberculose die behandeling vereist. Het identificeren van een groot aantal mycobacteriën duidt vaak op een extrapulmonaire vorm van tuberculose of generalisatie van de infectie.
- De veroorzaker van tuberculose werd niet gedetecteerd. Bacteremie is afwezig.
Wat kan het resultaat beïnvloeden?
Effectieve anti-tuberculosetherapie leidt na verloop van tijd tot het verdwijnen van mycobacteriën in klinisch materiaal.
Belangrijke opmerkingen
Om het juiste behandelingsschema voor te schrijven wanneer een patiënt met tuberculose wordt gediagnosticeerd, is het noodzakelijk om een test uit te voeren voor de gevoeligheid van mycobacteriën voor geneesmiddelen tegen tuberculose.
Ook aanbevolen
Wie maakt de studie?
Huisarts, therapeutist, ftaisiegeneesheer, uroloog, gynaecoloog, specialist in infectieziekten.