Hoe de analyse met PCR uit te voeren: beschrijving van de procedure

Polymerasekettingreactie is al 30 jaar bekend. Het wordt veel gebruikt in veel gebieden, van archeologie tot genetica.

Het is de PCR-methode die helpt om het vaderschap vast te stellen, maar meestal wordt het gebruikt om verschillende infectieziekten in het menselijk lichaam te identificeren.

Hoe wordt PCR-analyse uitgevoerd en wat is het? We zullen proberen deze vragen in detail te beantwoorden.

PCR-analyse - wat is het?

Polymerase-kettingreactie (PCR) is een zeer nauwkeurige methode voor moleculair genetische diagnose, waarmee verschillende besmettelijke en erfelijke ziekten bij mensen kunnen worden opgespoord, zowel in de acute als chronische fase, en lang voordat de ziekte zich kan manifesteren.

De PCR-methode is absoluut specifiek en correct uitgevoerd kan geen vals positief resultaat opleveren. Dat wil zeggen, als er geen infectie is, zal de analyse nooit laten zien wat het is. Daarom wordt nu heel vaak voor de goedkeuring van de diagnose een aanvullende PCR-analyse uitgevoerd om het veroorzakende agens en de aard ervan te bepalen.

Polymerase kettingreactie (PCR) in 1983, ontwikkeld door Carey Mulllis (VS), waarvoor hij in 1993 de Nobelprijs voor de chemie ontving.

Wat is het voordeel van deze methode?

Diagnose via deze methode maakt het mogelijk om het pathogeen direct te vinden in het gen dat is opgenomen in de materialen die worden bestudeerd. Dit is de meest nauwkeurige analyse van genitale infecties, verborgen infecties, verschillende seksueel overdraagbare aandoeningen.

Verschillen PCR-diagnostiek van andere methoden van laboratoriumonderzoek is als volgt:

• de methode is gericht op het identificeren van het pathogeen zelf;
• PCR-diagnose is universeel: voor de detectie van verschillende pathogenen;
• ziekten, slechts één biologisch monster van de patiënt is voldoende;
• de methode is zeer gevoelig en gaat niet gepaard met andere kruisreacties.

Bovendien is het voordeel van PCR-diagnostiek dat elk biologisch materiaal van de patiënt geschikt is voor analyse: bloed, afscheiding uit de geslachtsorganen, urine, sperma.

Welke infecties kan een uitstrijkje op PCR onthullen?

Een groot aantal pathogenen kan in het lichaam aanwezig zijn, inclusief "verborgen" ziektes die zich niet gedurende lange tijd manifesteren.

De uitstrijkanalyse op PCR maakt het mogelijk om dergelijke infecties te onthullen:

Het testmateriaal voor PCR is meestal sputum, speeksel, urine en bloed. Vóór de analyse moet u zich er zorgvuldig op voorbereiden, na een voorafgaand overleg met een arts te hebben gehad.

Bloed voor PCR wordt meestal op een lege maag gegeven. Goede resultaten laten een analyse zien wanneer het materiaal voor de studie wordt afgenomen van het cervicale kanaal of de urethra. In dit geval is het het beste om PCR-diagnostiek uit te voeren uiterlijk één dag na de geslachtsgemeenschap.

Variaties van PCR

PCR wordt op veel gebieden gebruikt voor analyse en wetenschappelijke experimenten. Er zijn verschillende analysemethoden:

1. Reverse transcriptie PCR (reverse transcriptie PCR, RT-PCR (Engels)) wordt gebruikt voor het amplificeren, isoleren of identificeren van een bekende sequentie uit een RNA-bibliotheek.
2. Omgekeerde PCR (inverse PCR (Eng.)) - wordt gebruikt als slechts een klein deel bekend is in de gewenste volgorde. Deze methode is vooral nuttig wanneer het nodig is om aangrenzende sequenties na DNA-insertie in het genoom te bepalen.
3. Geneste PCR (geneste PCR) wordt gebruikt om het aantal reactiebijproducten te verminderen. Twee paar primers worden gebruikt en twee opeenvolgende reacties worden uitgevoerd.
4. Asymmetrische PCR (asymmetrische PCR) wordt uitgevoerd wanneer het nodig is om hoofdzakelijk één van de ketens van het oorspronkelijke DNA te amplificeren. Gebruikt in sommige sequencing- en hybridisatiebepalingen.
5. Kwantitatieve PCR (kwantitatieve PCR, Q-PCR (Eng.)) Of real-time PCR wordt gebruikt om direct de meting van de hoeveelheid van een specifiek PCR-product in elke reactiecyclus te volgen.
6. Stap-PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - met deze benadering wordt het effect van niet-specifieke binding van primers verminderd.
7. Groepen-specifieke PCR (groep-specifieke PCR) - PCR voor verwante sequenties binnen een of tussen verschillende soorten, met behulp van conservatieve primers voor deze sequenties.

Als de nucleotidesequentie van de matrix gedeeltelijk of onbekend is, is het mogelijk om gedegenereerde primers te gebruiken, waarvan de sequentie gedegenereerde posities bevat waarin basen kunnen worden gelokaliseerd. De primersequentie kan bijvoorbeeld zijn:... ATH..., waarbij H A, T of C is.

Welke biologische materialen worden onderzocht?

Het materiaal voor PCR-onderzoeken, waarin vreemd bacterieel DNA kan worden gedetecteerd of het DNA of RNA van het virus, kan uit verschillende biologische media en menselijke vloeistoffen bestaan:

1. Urine. Het kan worden gebruikt voor de infectie van het urogenitale kanaal bij mannen en urine-organen bij vrouwen (bij mannen is het gebruik van urine als materiaal het epitheliale afschrapen).
2. Sputum. Het wordt gebruikt om tuberculose te diagnosticeren en minder vaak om respiratoire vormen van chlamydia en mycoplasmose te diagnosticeren. Sputum in een hoeveelheid van 15-20 ml wordt verzameld in een steriele (wegwerp) fles.
3. Biologische vloeistoffen. Prostaatssap, pleuraal, hersenvocht, vruchtwater, gewrichtsvloeistof, bronchoalveolaire lavage, speeksel worden volgens indicaties genomen.
4. Epitheliale schaafwonden uit slijmvliezen. Vaak gebruikt om seksueel overdraagbare aandoeningen (SOA's) te diagnosticeren, zoals gonorroe, chlamydia, mycoplasmose, ureaplasmosis, trichomoniasis, gardnerellezis, herpetische en andere infecties die de slijmvliezen beïnvloeden.
5. Biopsieën. De meest gebruikte biopsies van de maag en de twaalfvingerige darm voor de identificatie van Helicobacter pylori-infectie.
6. Bloed, plasma, serum. Gebruikt voor PCR-analyse van hepatitis B-, C-, D-, G-virussen, herpes, CMV, HIV, menselijke genen.

Hoe zich voorbereiden op de analyse?

De betrouwbaarheid van het PCR-resultaat is direct afhankelijk van de juistheid van de afgifte van materiaal voor onderzoek. Het materiaal mag niet worden verontreinigd, anders is het resultaat van het onderzoek niet objectief. De belangrijkste aanbevelingen voor het indienen van een PCR-analyse zijn de volgende vereisten:

1. Urine wordt 's ochtends afgeleverd in een steriele container.
2. Een bloedtest voor infectie moet 's morgens op de lege maag worden ingenomen.
3. Het is niet nodig om de dag voorafgaand aan de analyse seksuele activiteit te vertonen.

Het resultaat van de analyse zal 1,5-2 dagen na de procedure gereed zijn. Er zijn situaties waarin het resultaat op dezelfde dag kan worden voorbereid.

Het decoderen van de analyse van de CRP

Het interpretatieproces van het gepresenteerde onderzoek onderscheidt zich door zijn eenvoud. De resultaten van de PCR-analyse kunnen 1,5 tot 2 dagen na de aflevering van het materiaal worden verkregen. In sommige gevallen is het resultaat al op de eerste dag gereed en dit is wat ze kunnen betekenen:

• Een negatief resultaat geeft aan dat het infectieuze agens ontbreekt in het materiaal dat wordt gediagnosticeerd.
• Pcr-positief betekent dat het DNA of RNA van de pathogeen aanwezig is in het menselijk lichaam.

In sommige gevallen produceert u een kwantitatieve bepaling van micro-organismen. Dit geldt met name voor ziekten veroorzaakt door opportunistische micro-organismen. Omdat deze bacteriën hun negatieve impact alleen met overmatige hoeveelheden tonen.

Ook is kwantitatieve analyse van PCR belangrijk voor de keuze van therapeutische tactieken en voor het beheersen van de behandeling van virale infecties zoals HIV- en hepatitisvirussen.

Hoe nauwkeurig is PCR-diagnose van infecties?

De PCR-methode wordt gekenmerkt door hoge nauwkeurigheid, specificiteit en gevoeligheid. Dit betekent dat deze analyse in staat is om:

• nauwkeurig de aanwezigheid of afwezigheid van infectie bepalen;
• specificeer precies wat voor soort infectie (specificiteit);
• infectie opsporen, zelfs met een zeer laag DNA-gehalte van microben in biologisch materiaal,
• die is onderworpen aan onderzoek (gevoeligheid).

PCR-analyse: prijs en tijd

De prijs van een specifieke analyse hangt af van de infectie waarvoor u wordt gecontroleerd. Geschatte prijzen en voorwaarden:

1. STI: 300-500 roebel, tijd - 1 dag;
2. Epstein-Barr-virus, humaan papillomavirus, herpes-virus, cytomegalovirus: 300-500 roebel, termen - 1 dag;
3. Hepatitis A, B, C, D, G: kwalitatieve analyse van 650 roebel, kwantitatieve analyse van 2000 roebel. Voorwaarden - tot 5 dagen;
4. Antilichamen tegen het hepatitis C-virus, totaal (Anti-HCV) - 420 roebel;
5. Antilichamen tegen hepatitis C-virus, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 roebel;
6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300 - 400 roebel, voorwaarden - 1 dag;
7. HIV (antilichamen en antigenen) - 380 roebel;
8. HIV RNA, kwalitatief - 3500 roebel;
9. HIV-RNA, kwantitatief - 11.000 roebel.

Om geld te besparen, kunt u een vaste reeks analyses kiezen. Deze service wordt aangeboden door de meeste klinieken waar het mogelijk is om de analyse door te geven volgens de ERP-methode (invitro, onclinics, enz.).

PCR-diagnose van tuberculose

Tuberculose is een specifieke infectie, de focus ervan kan jarenlang in menselijke weefsels liggen en vervolgens gedurende enkele maanden worden verspreid. Dit is een chronische ziekte waarvan de optimale behandelingsregimes moeilijk te selecteren zijn. Een van de redenen hiervoor is de late diagnose, wanneer mycobacteriën, terwijl ze zich in het menselijk lichaam bevinden, al aan veel medicijnen zijn aangepast.

Welke moderne diagnosemethoden bestaan ​​er? PCR-diagnose - wat is het? Hoe wordt dit onderzoek gedaan? In welke gevallen wordt met deze methode tuberculose gediagnosticeerd en wat is de essentie ervan?

Wat is PCR-diagnostiek

Dit is een van de modernste methoden om niet alleen ziekten te diagnosticeren, maar ook om biologisch materiaal te detecteren. PCR-diagnostiek is relatief recent uitgevonden. Ongeveer 30 jaar geleden, in 1983, stelde een Amerikaanse biochemicus, Carey Banks Mullis, een complex herstelplan voor het biologische materiaal van micro-organismen voor in een kort segment. Dankzij zijn ontdekking kreeg de wetenschapper de hoogste onderscheiding - de Nobelprijs.

Wat is het - PCR-diagnose van infecties? Polymerase-kettingreactie (PCR) is een diagnose van de detectie van virale ziekten, gebaseerd op werkwijzen van genetische manipulatie. Het wordt veel gebruikt in de medische microbiologie, immunologie en virologie. De methode is universeel en helpt om een ​​diagnose te stellen met een kleine hoeveelheid materiaal. Een infectie kan letterlijk worden gedetecteerd in de eerste uren van infectie ermee, lang voordat de eerste symptomen van de ziekte verschijnen.

De methode bestaat erin om uit het materiaal van een zieke persoon niet de ziekteverwekker zelf te halen, maar fragmenten van het genoom (DNA-deeltjes), de biosynthese ervan met daaropvolgende bepaling tot welke klasse van micro-organismen het verkregen genetische materiaal behoort door middel van moleculair genetische methoden.

Ondanks het feit dat dit een complex proces is, kost het veel minder tijd dan veel biologische methoden voor het detecteren van infectieuze agentia. Binnen slechts een paar uur kan een micro-organisme worden gedetecteerd met behulp van PCR. Om dit te doen, is het niet nodig om het te isoleren van de omgeving (bloed, hersenvocht, sputum) en het te laten groeien op kunstmatige voedingsmedia. Het is voldoende dat een klein fragment van de DNA-streng van het infectieuze agens aanwezig is in het materiaal dat wordt bestudeerd.

De basis van de reactie is de mogelijkheid onder kunstmatige omstandigheden (in vitro) om de synthese van nucleïnezuurmoleculen van het infectieuze agens te creëren.

Wat is nodig voor PCR?

1. Primers zijn de DNA-segmenten waaruit biosynthese of creatie begint.
2. Nucleotiden of complexe verbindingen die de basis vormen van een DNA- of RNA-molecuul.
3. Polymerase kettingreactie is onmogelijk zonder de aanwezigheid van polymerase, wat een enzym is dat de PCR versnelt.

Stadia van PCR-diagnostiek

Hoe wordt moleculaire diagnose uitgevoerd door PCR? De procedure is eenvoudig en neemt een korte tijd in beslag, rekening houdend met de verzameling van materiaal.

1. Voordat ze met het onderzoek beginnen, nemen ze het nodige biologische materiaal in - dit is het bronchiale waswater, bloed, maaginhoud, sputum. Het type biologisch materiaal hangt af van het vermoedelijke pathogeen.
2. Denaturatie of vernietiging van de primaire structuur van DNA, dat uit twee ketens bestaat. De essentie van deze fase is om de twee ketens te scheiden onder invloed van hoge temperaturen (het maximum is 98 ºC, dat niet langer duurt dan twee minuten).
3. In het volgende stadium van PCR, genaamd uitgloeien, wordt de temperatuur met verschillende graden verlaagd, zodat de primer aan de DNA-streng zal binden.
4. Verlenging, waarbij de synthese van de gewenste moleculen direct plaatsvindt.

Als resultaat ontvangen slechts 25-30 van dergelijke cycli het noodzakelijke aantal kopieën van het DNA van het micro-organisme, die gemakkelijk te herkennen zijn.

Vereist PCR een diagnose van tuberculose?

Het is niet mogelijk voor absoluut alle mensen met vermoedelijke tuberculose om PCR uit te voeren, omdat de methode dure apparatuur vereist. Niet alle openbare klinieken kunnen het zich veroorloven om het te kopen. Bovendien was het zo dat de gebruikelijke methoden om een ​​infectie te diagnosticeren in de meeste gevallen ook zichzelf rechtvaardigen.

Deze omvatten:

• patiëntonderzoek, geschiedenis nemen;
• volledig onderzoek van de persoon;
• een studie met de tuberculinetest van Mantoux;
• radiografie of fluorografie;
• computer diagnostiek indien nodig;
• microbiologische onderzoeksmethoden: uitstrijk microscopie en sputum bacteriologisch onderzoek.

PCR voor tuberculose wordt in speciale gevallen uitgevoerd wanneer het moeilijk is om een ​​diagnose te stellen of het niet mogelijk is om andere instrumentele methoden uit te voeren.

Ondanks de overvloed aan diagnostische methoden, blijft de incidentie van tuberculose toenemen. Momenteel is er niet alleen de groei, maar ook andere kenmerken:

• de ziekte komt vaak in ernstige vorm voor;
• het aantal dodelijke gevallen neemt toe;
• steeds resistenter tegen moderne chemotherapie zijn gediagnostiseerde vormen van de ziekte.

De terughoudendheid van de mensen zelf om jaarlijks routine-medische onderzoeken te ondergaan, de afwijzing van vaccinatie leidt tot de verspreiding van tuberculose. In dergelijke omstandigheden hebben we snelle, informatieve en effectieve onderzoeksmethoden nodig die toegankelijk moeten zijn voor kinderen en volwassenen. Alle bovenstaande diagnostische methoden zijn veel slechter dan PCR.

Voordelen van het diagnosticeren van tuberculose met PCR

Dit onderzoek, hoewel nieuw, heeft zichzelf goed bewezen, vooral in controversiële gevallen waarin het onmogelijk is om een ​​diagnose te stellen om een ​​aantal redenen.

Dankzij PCR is het veel gemakkelijker om de veroorzaker van tuberculose in het testmateriaal te detecteren.

De voordelen van PCR-diagnose zijn als volgt.

1. Dit is een snelle analyse. Een klein fragment van het DNA-molecuul kan worden gebruikt om binnen enkele uren (ongeveer vijf) een diagnose te stellen, die met succes wordt gebruikt in noodsituaties, wanneer bijvoorbeeld vóór een operatie moet worden vastgesteld of iemand ziek is van tuberculose.
2. PCR-analyse is toegestaan ​​in het geval dat andere methoden niet beschikbaar of verboden zijn (voor de detectie van longtuberculose, moet u soms meerdere radiografische beelden maken, wat een grote dosis straling zal zijn).
3. Met behulp van PCR wordt elke biologische omgeving onderzocht op de aanwezigheid van een pathogeen daarin. U kunt bijvoorbeeld een studie van hersenvocht uitvoeren, als er een vermoeden bestaat van tuberculeuze meningitis.
4. Toegestane PCR-diagnose van infectieziekten bij kinderen, omdat de methode veilig is.
5. Hiermee kunt u de ziekteverwekker in elk stadium van de ziekte identificeren.
6. De hoge gevoeligheid van PCR maakt het mogelijk om Mycobacterium tuberculosis te detecteren, zelfs als er slechts een paar micro-organismen in het biologische materiaal aanwezig zijn.
7. Het is goed om uit te voeren voor de diagnose van ziekte-recidief.

Immers de lees-PCR lijkt een bijna perfecte diagnostische methode, die iedereen met verdenking van tuberculose zou moeten maken. Maar er zijn ook nadelen, ze moeten in aanmerking worden genomen.

Nadelen van PCR bij de diagnose van tuberculose

In onze tijd zijn dergelijke diagnoses zeldzamer dan regelmaat. En daarvoor is er reden.

1. Dit is een dure onderzoeksmethode. In veel klinieken is apparatuur voor PCR afwezig vanwege de hoge kosten, maar analyse kan nog steeds worden uitgevoerd in betaalde laboratoria.
2. Direct na de behandeling kunnen dode mycobacteriën of in kleine hoeveelheden leven nog aanwezig zijn in het menselijk lichaam (het resultaat zal positief zijn tijdens PCR-diagnostiek), dus de methode zal op dit moment onbetrouwbaar zijn, het heeft geen zin om het uit te voeren.
3. Mutaties van mycobacteriën resulteren in niet-effectieve PCR - een normale DNA-strengsequentie kan niet worden gesynthetiseerd.
4. Het is noodzakelijk om de juiste omgeving voor de studie te kiezen, bloed wordt alleen ingenomen als het wordt vermoed besmet te zijn (sepsis), het is niet nodig om sputum te nemen als er sprake is van tuberculose van de organen van het zenuwstelsel. In dit geval kan de PCR het pathogeen niet detecteren en is de diagnose niet informatief.

Indicaties voor het detecteren van tuberculose met behulp van PCR-analyse

PCR-diagnose van tuberculose wordt het vaakst uitgevoerd in controversiële gevallen. Wanneer verwijzen artsen naar deze studie?

1. Als het moeilijk is om een ​​diagnose te stellen met behulp van de gebruikelijke beschikbare methoden, maar er was contact met een patiënt met tuberculose.
2. In het geval dat een persoon niet aan een kliniek kan worden afgeleverd om routinematige routinetests voor tuberculose te ondergaan, is het gemakkelijker om hem met PCR te onderzoeken, omdat het sputum voor de test in een pot kan worden afgeleverd en de diagnose binnen een paar uur wordt bevestigd.
3. Als een persoon een spoedoperatie gaat krijgen en het is dringend nodig om uit te zoeken of hij ziek is van tuberculose.
4. Indien nodig, is een zwangere vrouw ook beter om te onderzoeken op tuberculose met behulp van PCR, omdat de methode veilig is.
5. Op betaalde basis is iedereen die niet is gediagnosticeerd met tuberculose bevestigd met bacteriologische methoden en fluoroscopie. Dit gebeurt wanneer de laesie in de longen onmerkbaar is in het directe beeld en de persoon tijdens de bevalling van sputum voor het onderzoek de aanbevelingen voor de juiste verzameling van materiaal niet kon volgen. In dit geval maakt de persoon zich zorgen over alle symptomen die kenmerkend zijn voor longtuberculose.
6. Als er twijfels zijn over de resultaten van de Mantoux-test.
7. Het verdient de voorkeur een PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen te doen. De procedure is veilig, creëert geen extra blootstelling aan straling en is effectief bij het opsporen van moeilijk te diagnosticeren vormen van de ziekte.

Tijdige diagnose van tuberculose is de sleutel tot een goed voorgeschreven behandeling en het verminderen van de verspreiding van de ziekte. Vaak zijn bekende ziektedetectiemethoden niet altijd effectief. Daarom is PCR vandaag de dag een van de meest betrouwbare en veilige manieren om infectie te detecteren in de vroege stadia van zijn ontwikkeling.

PCR-analyse

PCR (polymerasekettingreactie) is veruit de snelste en meest betrouwbare methode voor het diagnosticeren van infectieziekten.

Het principe van de polymerasekettingreactiemethode werd ontwikkeld door Kary Mullis in 1983. Voor zijn ontdekking ontving K. Mullis in 1993 de Nobelprijs voor de Scheikunde.

De PCR-methode maakt het mogelijk om een ​​significante toename in kleine concentraties van bepaalde nucleïnezuurfragmenten (DNA) in biologisch materiaal (monster) te bereiken. De methode is gebaseerd op meervoudig selectief kopiëren (amplificatie) van een bepaald gedeelte van DNA met behulp van enzymen onder kunstmatige omstandigheden.

De voordelen van de PCR-diagnostische methode als een diagnostische methode voor infectieziekten

Directe detectie van pathogenen

Veel traditionele diagnostische werkwijzen, zoals enzymimmunoassay, detecteren eiwitmerkers die de producten zijn van de vitale activiteit van infectieuze agentia, die alleen indirect bewijs van de aanwezigheid van infectie geeft. Identificatie van een specifiek DNA-gebied van een pathogeen met behulp van de PCR-methode geeft een directe indicatie van de aanwezigheid van het pathogeen.

Hoge specificiteit

De hoge specificiteit van de PCR-methode is te wijten aan het feit dat een uniek DNA-fragment wordt gedetecteerd in het onderzochte materiaal. De specificiteit wordt bepaald door de nucleotidesequentie van de primers, wat de mogelijkheid uitsluit om valse resultaten te verkrijgen, in tegenstelling tot immunologische analysemethoden, waarbij fouten in verband met kruisreagerende antigenen frequent zijn.

Hoge gevoeligheid

De PCR-methode maakt het mogelijk om zelfs enkele cellen van bacteriën of virussen te detecteren. PCR-analyse onthult de aanwezigheid van pathogenen van infectieziekten in gevallen waarin andere methoden (immunologisch, bacteriologisch, microscopisch) dit niet kunnen. De gevoeligheid van de PCR-analyse is 10-100 cellen per monster (de gevoeligheid van immunologische en microscopische tests is 103-105 cellen).

Universaliteit van de procedure voor detectie van verschillende pathogenen

Het materiaal voor de studie met PCR is het DNA van de ziekteverwekker. De methode is gebaseerd op de detectie van een DNA-fragment of RNA dat specifiek is voor een bepaald organisme. De gelijkenis van de chemische samenstelling van alle nucleïnezuren maakt het gebruik van uniforme methoden van laboratoriumonderzoek mogelijk. Dit maakt het mogelijk om verschillende pathogenen te diagnosticeren van een enkele bioassay.

Hoge analyseresultaten

Voor PCR-analyse is isolatie en kweek van de kweek van het pathogeen niet vereist, wat veel tijd kost. De uniforme methode voor het verwerken van het biomateriaal en de detectie van reactieproducten en de automatisering van het amplificatieproces maken het mogelijk om een ​​complete analyse uit te voeren in 4-5 uur.

Het vermogen om niet alleen acute, maar ook latente infecties te diagnosticeren

De PCR-werkwijze is in het bijzonder effectief voor het diagnosticeren van moeilijk te cultiveren, niet-gecultiveerde en persistente vormen van micro-organismen die vaak voorkomen bij latente en chronische infecties, omdat deze werkwijze de moeilijkheden vermijdt die gepaard gaan met het laten groeien van dergelijke micro-organismen in het laboratorium. Het gebruik van PCR-diagnostiek is ook zeer effectief tegen pathogenen met hoge antigene variabiliteit en intracellulaire parasieten.

Hoe effectief is testen van sputum op tuberculose door PCR?

Om Koch-sticks bij mensen te identificeren, worden verschillende diagnostische methoden gebruikt. Dankzij hem kan de pathologie zelfs in het beginstadium worden gedetecteerd, wat de kansen op herstel van de patiënt vergroot. Sputum-analyse voor tuberculose is een techniek die het meest wordt gewaardeerd en die redelijk effectief is. Wat is het en hoeveel kost zo'n analyse?

Wat is de analyse van sputum door PCR?

PCR staat voor polymerasekettingreactie. Deze methode is effectief tegen infectieziekten. Om een ​​duidelijke diagnose te stellen, hoeft u geen grote hoeveelheid biomateriaal te verzamelen en lang te wachten, zoals in het geval van sputumzaaien.

De methode is gebaseerd op het verkrijgen van DNA van deeltjes van micro-organismen. Verder zal moleculair genetisch onderzoek bepalen welk type micro-organismen het beschikbare materiaal zou moeten omvatten. Onder condities van een reageerbuis, zal een specialist bacteriemoleculen synthetiseren en binnen een paar uur de juiste conclusies trekken.

effectiviteit

Sputum-analyse voor Mycobacterium tuberculosis is effectief wanneer Koch's toverstok het ademhalingssysteem heeft geraakt. In dit geval kan de ziekte gemakkelijk worden geïdentificeerd, zelfs in de eerste uren van infectie.

Maar sputumanalyse zal geen betrouwbaar resultaat laten zien als tuberculose aanwezig is:

• botten;
• hersenen, ruggenmerg;
• zenuwstelsel;
• gewrichten, etc.

De fytotherapeut kan het type van de ziekte bepalen, rekening houdend met de huidige symptomen en op basis van de resultaten van algemene en andere analyses.

Het is ook niet geschikt voor een dergelijke methode van onderzoek in het geval dat u een controle-analyse moet uitvoeren na de therapeutische behandeling van de ziekte. Het resultaat is positief, omdat er in het lichaam in elk geval nog steeds een IBC-status aanwezig is. Het is beter om de voorkeur te geven aan een andere diagnostische procedure.

Contra-indicaties voor de methode

Als zodanig zijn er geen contra-indicaties voor sputumonderzoek voor tuberculose met behulp van PCR. Er zijn beperkingen. Zoals hierboven vermeld, is het niet nodig om het uit te voeren na de behandeling van tuberculose. De resultaten zullen niet nuttig zijn. Hier is het wenselijk om een ​​andere diagnose te stellen.

Bovendien zijn er geen andere obstakels voor deze diagnose. Sputum kan in elke leeftijdscategorie en voor alle bijbehorende ziekten worden onderzocht. Zelfs als er geen overvloedige afgifte van sputum is, kan analyse worden uitgevoerd door slijm te nemen met behulp van bronchoscopie.

voordelen

In deze methode, de massa van plussen, deze omvatten:

1. Hoge specificiteit en gevoeligheid. Alleen de veroorzaker van tuberculose wordt gedetecteerd. Er kan geen vals antwoord worden gegeven als alle nuances van de procedure in aanmerking worden genomen. Mycobacteriën worden zelfs bij hun minimumaantal gedetecteerd. Zelfs als er 10 abnormale cellen in het verzamelde materiaal zitten, wordt de infectie gedetecteerd.
2. De snelheid van het krijgen van een antwoord. Hoeveel analyse is er gedaan? Na 3-5 uur kun je het resultaat krijgen. Het is niet nodig om sputumkweek te doen voor tuberculose, en dit vermindert de tijd.
3. Je kunt je identificeren als een verborgen infectie en degene die zich in een acute vorm bevindt.
4. Er zijn geen absolute contra-indicaties. Dit maakt het mogelijk om de procedure voor iedereen zonder uitzondering uit te voeren (zelfs voor kleine kinderen), en vooral wanneer andere methoden niet zijn opgelost.
5. Met behulp van PCR-diagnostiek worden verschillende biomaterialen (urine, uitwerpselen, bloed, speeksel, hersenvocht, etc.) bestudeerd.
6. De methode onthult tuberculose in de vroege stadia, in de eerste uren na infectie.

naar inhoud ↑

tekortkomingen

Naast de positieve kanten zijn er ook negatieve. Dit is:

1. PCR-analyse is een duur "plezier". Bovendien is de apparatuur die nodig is voor de implementatie niet beschikbaar in elk medisch centrum. In klinieken is het zelden aanwezig, omdat de waarde ervan ook groot is. Als we het hebben over privéklinieken, dan kun je dit soort diagnose wel vinden. Sta jezelf toe, helaas, kan niet iedereen.
2. Het vertoont een vals-positief resultaat bij mensen die onlangs een behandeling met tuberculose hebben ondergaan.
3. Als MBC is gemuteerd, kan de methode ook valse resultaten opleveren.
4. Als het materiaal niet goed wordt ingezameld of als de specialist die het onderzoek doet onvoldoende kwalificatieniveau heeft, is een storing ook mogelijk. In sommige gevallen moet de procedure meerdere keren worden herhaald en telkens wanneer de betaling wordt herhaald.

naar inhoud ↑

Voorbereiding voor analyse

Om ervoor te zorgen dat het materiaal van hoge kwaliteit is, moet het correct worden geassembleerd en op de juiste manier worden voorbereid.

Er zijn bepaalde regels voor het verzamelen van sputum voor tuberculose. Het actie-algoritme is als volgt:

1. Zelfs aan de vooravond moet iemand 's avonds een slijmoplossend drankje drinken (als het sputum slecht weg beweegt). Zelfs als het niet zou helpen, moet de inhalatie worden uitgevoerd op basis van een medicinaal verdunnend en slijmoplossend medicijn. Bij afwezigheid van sputum is de patiënt het doelwit voor bronchoscopie. Het is tijdens deze procedure dat het materiaal voor de studie wordt genomen.
2. Koop vooraf een speciale container. Het is steriel en luchtdicht, dus niets extra's kan daar worden geplaatst, maar ook van tevoren worden geopend.
3. De kamer waar het sputum wordt verzameld, moet goed worden geventileerd. Het is noodzakelijk om ramen, deuren te openen, de kap aan te zetten. Een andere goede optie is om wat frisse lucht te krijgen (bijvoorbeeld naar het balkon of naar de binnenplaats).
4. Vlak voor de procedure moet je iedereen waarschuwen zodat niemand de kamer binnenkomt waar alles zal gebeuren. Er mogen geen extra microdeeltjes in het biomateriaal zitten - dit is belangrijk.
5. Eten vóór het plukken wordt niet aanbevolen.
6. Mond en keel spoelen.
7. Speeksel wordt uitgespuugd. De capaciteit zou minimaal moeten zijn.
8. Door hoest haalt een persoon het slijm eruit en spuugt het in een voorbereide container. Sluit na de procedure het deksel goed en breng het monster naar het laboratorium.

Sputum verzamelen moet de arts vertellen. Als de patiënt het niet alleen durft, komen hulpverleners te hulp. Tijdens de manipulatie zetten ze een speciaal beschermend masker op. Verzamel sputum in een speciale ruimte, waar geen vreemden voor kunnen komen. Als de patiënt niet naar de kliniek kan komen, komt de specialist bij hem thuis en helpt bij het verzamelen van slijm.

Als bronchoscopie wordt uitgevoerd, wordt de patiënt met een apparaat in de luchtpijp geïnjecteerd - een bronchoscoop. Het is met zijn hulp dat het materiaal wordt genomen.

Voor betrouwbaarheid is het raadzaam om de analyse drie keer door te geven, namelijk:

• in de ochtend op een lege maag;
• na de eerste keer na 4-5 uur;
• 24 uur na de eerste studie en ook vóór de maaltijd.

naar inhoud ↑

Hoe wordt deze analyse uitgevoerd?

Het behalen van een sputumtest voor tuberculose is slechts een deel van het werk. Belangrijkste vooruit. Veel hangt af van hoe een specialist is voorbereid.

Het verloop van de studie is als volgt:

1. De specialist gaat verder met de vernietiging van de primaire structuur van DNA (denaturatie). Er zijn hier twee kettingen. Bij hoge temperaturen zijn ze gescheiden.
2. In de volgende fase wordt de temperatuur verlaagd (uitgegloeid). Dit is nodig voor de verbinding van de DNA-streng met de primer.
3. De derde fase is verlenging. Hier worden de nodige moleculen gesynthetiseerd.

naar inhoud ↑

Decoderingsresultaten

Mycobacterium tuberculosis in sputum door PCR kan worden gedetecteerd of niet. Een positief resultaat is gebaseerd op het feit dat er DNA van Koch-sticks aanwezig is in het biomateriaal. Dit suggereert dat de persoon is geïnfecteerd. Met een negatieve - 98% van het feit dat het onderwerp niet is geïnfecteerd.

Indicatoren kunnen worden beoordeeld op:

• welke fase van pathologie (latent of actief);
• hoeveel het lichaam is aangetast;
• of de gekozen behandeling in een bepaald geval effectief is.

Houd er rekening mee dat niets grondig is. Daarom kan er een vals-positief of fout-negatief resultaat zijn. Om de juistheid te garanderen, worden andere diagnostische procedures aanbevolen of PCR wordt tweemaal (driemaal) uitgevoerd.

Kostenanalyse in verschillende centra

Je kunt sputum geven voor PCR in verschillende klinieken. Laten we voorbeelden geven van verschillende populaire centra in Moskou met prijsbeleid.

Methoden voor het testen van sputum voor tuberculose

Sputum-analyse voor tuberculose is opgenomen in de reeks diagnostische maatregelen die nodig zijn om de diagnose te identificeren en te verduidelijken. Het sputumgehalte helpt een goed behandelingsregime te maken.

Hoe een sputumtest voor tuberculose te halen

Artsen hebben regels ontwikkeld voor het maken van de analyse. Speeksel wordt 's ochtends verzameld voordat de persoon heeft ontbeten. Eerst voert de patiënt hygiëneprocedures uit:

• reiniging tandglazuur;
• grondig spoelen met schoon water uit de mondholte en keelholte.

Dan begint de onmiddellijke levering van materiaal voor analyse. Hoe slaag ik in een sputumtest? Vereisten voor de procedure:

1. Voorbereiding begint van tevoren, 's avonds. De patiënt wordt aangemoedigd om speciale medicijnen te nemen die de pulmonale secretie natuurlijker maken. Dit zijn slijmoplossend en verdunnende verbindingen. Als dergelijke procedures niet helpen, voer dan inhalatie uit met een farmaceutische samenstelling voor slijm.
2. Containers voorbereiden op sputum. Mucus moet worden verzameld in gesteriliseerde schalen, strak sluiten, strak.
3. Vóór de bevalling ophoesten en in een bak spugen. Het speeksel moet niet groot zijn, het heeft sputum van het strottenhoofd nodig. Bacteriën van de mondholte zijn vreemd in de analyse.
4. Verzamel speeksel in een kamer met uitstekende ventilatie. De analyse wordt uitgevoerd door de spiegel te openen en de kap te laten lopen. Het is raadzaam om de ramen te openen of naar buiten te gaan.

Tijdens de procedure in de kamer is het verboden om binnen te komen. Buitenstaanders kunnen bijdragen aan de microflora van het kantoor, en dus aan het sputum, pathologische formaties. Medische hulpverleners ontvangen een analyse in een speciaal masker (gasmasker).

Sputum-analyse voor transcriptie van tuberculose

Decoderen begint met kijken naar het uiterlijk van het slijm. Pathologie karakteriseert de verandering in kleur - het wordt donker, met zichtbare toevoegingen van bloed. Kleur is niet de hoofdindicator. Sputum wordt donker door het drinken van rode wijn, koffiepassie. Sommige medicijnen en gekleurde dranken veranderen het uiterlijk van slijm.

Het verzamelde materiaal wordt ontcijferd door twee indicatoren, dat wil zeggen, artsen krijgen twee resultaten:

Positief antwoord

Analyse van het resulterende sputum bevestigt de aanwezigheid van de ziekte in het lichaam. Welke dit bevestigt:

• vreemde materie of onbekende insluitsels;
• de aanwezigheid van mucusstolsels;
• zichtbare strepen;
• onaangename purulente of infectieuze geur;
• pus.

Macroscopische onderzoeksmethode biedt andere gegevens:

• fibrineuze convoluties;
• Koch lens wand formaties;
• producten van ontbinding decompositie van bacteriële stoffen;
• resten van het pathologische proces in het longweefsel.

Een positief resultaat onthult een verhoogde hoeveelheid eiwitverbindingen. Het bereikt 100-120 g / l.

Een andere microscopische methode maakt het mogelijk om andere gevaarlijke elementen te identificeren:

• alveolaire macrofagen;
• overschat samenstelling van leukocyten;
• hoge snelheid van lymfocyten.

Bij tuberculose probeert iemand vaak uit zijn mond te spuwen. Hemoptys verhoogt de vorming van rode bloedcellen. De hoeveelheid speeksel in de mond is zodanig dat een persoon het niet kan inslikken zonder het te merken. Het is meer dan in een gezonde staat.

Negatief antwoord

De studie toont aan dat het aantal leukocyten klein is, overeenkomt met de norm. Microbacteriën worden ook niet gedetecteerd. Als de patiënt zich niet gezond voelt, zal de specialist een aanvullend onderzoek voorschrijven. Het is mogelijk dat de ziekte geassocieerd is met longziekte. Typen en methoden voor aanvullende diagnostiek zijn afhankelijk van de symptomen en de conditie van de patiënt.

Hoe is de studie van slijm

Tuberculose is een gevaarlijk pathologisch effect op longweefsel, hun desintegratie wordt waargenomen. De analyse wordt op verschillende manieren uitgevoerd. De meest voorkomende - ELISA (immunoassay). De essentie van de methode:

1. Antilichamen worden toegevoegd aan de oplossing waarin een deel van het sputum is geplaatst.
2. Controleer de concentratie van antigenen, vergeleken met de norm van een gezond lichaam.
3. Bepaal de activiteit van de pathologische omgeving.
4. Gediagnosticeerd.

De tweede versie van het laboratoriumonderzoek is WASTES. Neem voor de methode speciale medische apparatuur. De essentie van hardware-onderzoek:

1. In de sputum geïnjecteerde micro-omgeving voor het beoogde type infectie.
2. Het apparaat begint te groeien bij bepaalde temperatuurstammen van bacteriën.
3. Koolstofdioxide wordt geproduceerd in het proces en sensoren halen het op.
4. Het gas combineert met de kleurstof.
5. Maak op de fluorescentie-index conclusies over het type ziekte.

De eenvoudigste manier is cultureel. Stuifmeel gezaaid in een speciale omgeving. De arts onderzoekt de soorten kolonies van microbiële formaties. De methode is het langst, maar stelt u in staat om de diagnose te bewijzen. Het wordt zeer zelden gebruikt, juist vanwege een lange periode van tijd, wat niet altijd geschikt is voor de patiënt.

Analyse van sputum pcr voor tuberculose

PCR is een afkorting van de medische term polymerasekettingreactie. Diagnostiek is een van de nieuwste ontwikkelingen van wetenschappers. Het werd geopend in 1983, het belang van ontdekking wordt gewaardeerd in de wereld, de wetenschapper ontving de hoogste erkenning - de Nobelprijs.

De methode is gebaseerd op het gebruik van genetische manipulatie. Zijn veelzijdigheid in de behoefte aan een kleine hoeveelheid materiaal voor een nauwkeurige diagnose. Identificatie van infectie met tuberculose is echt in de vroege uren van infectie, zonder te wachten op de ontwikkeling van de ziekte.

De essentie van de methode die polymerase is:

• een patiënt neemt een fragment van DNA-deeltjes;
• biologische synthese van het materiaal uitvoeren;
• bepaald door de klasse van micro-organismen.

Het proces is technologisch complex, het gaat om moleculair genetisch onderzoek. PCR voor tuberculose duurt letterlijk een paar uur. De tijd die nodig is voor andere methoden kan niet met snelheid worden vergeleken. Na het passeren van de analyse wacht de patiënt op de detectie van de veroorzaker. Het proces dat ten grondslag ligt aan alleen een specialist kan begrijpen. Een gewoon persoon begrijpt de fijne kneepjes van de methode niet.

Hoe is de diagnose van tuberculose tests:

1. Neem het nodige materiaal voor analyse. Wat zou het kunnen zijn: bloed, maag, sputum, water, gewassen met bronchiën.
2. Het type materiaal wordt gekozen afhankelijk van het type mogelijke pathogene infectie.
3. De volgende stap is het bestuderen van de ketenverbinding. Twee kettingen worden onderworpen aan hoge temperaturen tot 98 graden. Het stadium wordt denaturatie genoemd (vernietiging van de structurele DNA-keten). Temperatuur belichtingstijd - tot 2 minuten.
4. De volgende fase is gloeien. De temperatuur wordt verlaagd, de primer kan verbinding maken met de DNA-streng.
5. Als gevolg hiervan treedt verlenging op - de synthese van moleculen die nodig zijn voor het proces.

Voor een dergelijke analyse is speciale apparatuur vereist. Het is duur, dus het is niet beschikbaar in een gezondheidszorginstelling. PCR wordt uitgevoerd in moeilijke gevallen, wanneer er geen exact resultaat is van conventionele diagnostische methoden, is het onmogelijk om instrumentele methoden uit te voeren voor het controleren van de toestand van de patiënt.

De voordelen van PCR-technologie:

1. De snelheid van het behalen van het resultaat. Ongeveer 5 uur een arts heeft nauwkeurige gegevens. Met deze snelheid kunt u de patiënt in nood helpen. Vaker is het de pre-operatieve periode.
2. Toegestaan ​​als andere methoden niet kunnen worden gebruikt. De frequente herhaling van röntgenstralen leidt bijvoorbeeld tot straling. PCR is niet gevaarlijk voor de patiënt.
3. Je kunt elke biologische omgeving verkennen. Zelfs complexe vormen van tuberculose worden geïdentificeerd.
4. De methode is veilig, daarom geschikt voor kinderen.
5. Infectie wordt in elk stadium gedetecteerd.
6. PCR laat niet toe om zelfs een klein aantal bacteriële micro-formaties te verbergen.
7. Geschikt om mogelijke herhaling van tuberculose te controleren.

Hoeveel doet sputum-analyse voor tuberculose

Er worden meer dan één keer monsters genomen. Herhalingen sluiten de mogelijkheid van fouten uit of het verkrijgen van materiaal van slechte kwaliteit dat de werkelijke positie en toestand van de patiënt niet weerspiegelt. Hoeveel keer om sputum te verzamelen, vertel het de behandelende arts. De beste optie is drie keer per dag. Soms zijn extra monsters nodig. Gedurende welke periode verzamelen zij:

1. Voor het eten in de ochtend.
2. 3-4 uur na de eerste test.
3. Op de tweede dag, ook voor de maaltijd.

Tuberculose is een gevaarlijke ziekte die het lichaam van een persoon kan aantasten. Er zijn veel infectiesituaties. Probeer niet te wachten op heldere symptomen, met een verdenking van de mogelijkheid van infectie. Het moet worden getest, onderzocht en op tijd worden gegeven om met de behandeling te beginnen.

PCR-diagnose van tuberculose bij kinderen en volwassenen: aanwijzingen voor

De Wereldgezondheidsorganisatie erkende 20 jaar geleden dat de verspreiding van tuberculose uit de hand gelopen was en de omvang van een epidemie bereikte. Sindsdien is de situatie niet verbeterd. Jaarlijks worden meer dan een miljoen gevallen van de ziekte gediagnosticeerd, waarvan bijna een kwart dodelijk is. In het laatste decennium is de incidentie van kinderen toegenomen, de meeste vormen van de ziekte lenen zich niet voor standaard antibiotische therapie.

Tegenwoordig is een van de wereldwijde taken voor de geneeskunde de ontwikkeling van dergelijke diagnostische methoden die het mogelijk maken om pathologie te identificeren vóór het begin van uitgesproken klinische symptomen. Een daarvan is de polymerasekettingreactie (PCR) voor tuberculose, die helpt om Koch-ziekteverwekkende sticks in bloed, sputum en andere biologische vloeistoffen te detecteren.

Diagnose van tuberculose

Screeningtests zijn gericht op het detecteren van patiënten, dragers van tuberculose en het voorkomen van de verspreiding van infecties in de samenleving. Voor kinderen onder de 14 jaar wordt de Mantoux-test massaal gebruikt. Dit is een immunologische test waarbij een dosis tuberculine subcutaan wordt geïnjecteerd - een complex mengsel van het genetisch materiaal van verschillende soorten mycobacteriën. Het verschijnen van een uitgesproken reactie duidt op een actief voorkomend infectieus proces.

Voor preventief onderzoek bij volwassenen met fluorografie of röntgenfoto's. Deze methoden helpen bij het visualiseren van pathologische laesies in longweefsel. Het veroorzaakt echter moeilijkheden bij het onderscheiden van tuberculose van een andere organische pathologie (kwaadaardige en goedaardige neoplasmata, ontstekingsprocessen, parasitaire invasies, professionele longschade).

Om de structuur en de omvang van de pathologische focus te verduidelijken, zijn aanvullende instrumentele onderzoeken nodig:

• gerichte radiografie;
• computertomografie;
• magnetische resonantie beeldvorming.

Methoden voor de diagnose van tuberculose

In het geval van twijfelachtige resultaten en voor de benoeming van adequate therapie, is er behoefte aan nauwkeurigere diagnostische methoden die het mogelijk maken om de pathogeen te isoleren. Microscopisch en bacteriologisch onderzoek van sputum wordt gebruikt om lange tijd longvormen van tuberculose te bevestigen.

In de afgelopen jaren is de incidentie van mycobacterium van verschillende organen en systemen - de nieren, botten, darmen, huid - frequenter geworden. Om deze vormen van tuberculose, echoscopische onderzoeken, urine- en feceskweek te identificeren, kunnen endoscopische onderzoeken worden gebruikt.

PCR-diagnostiek voor tuberculose zal helpen de aanwezigheid van Koch-stengels in het bloed te bevestigen, evenals de gevoeligheid voor bepaalde geneesmiddelen. Dit is een zeer effectieve methode op basis van de detectie van het bacterieel genetisch materiaal in verschillende biologische vloeistoffen.

Specificiteit en indicaties

Polymerase-kettingreactie is een zeer gevoelige microbiologische diagnostische methode, die is gebaseerd op de principes van genetische manipulatie. Om de aanwezigheid van een pathogeen in een biologisch materiaal te bevestigen, is het voldoende om daarvoor een uniek nucleïnezuurfragment te detecteren. PCR voor tuberculose kan bacteriën in het bloed, sputum, urine detecteren.

Op dit moment zijn verschillende analysemethoden ontwikkeld. De meest populaire onder hen zijn de volgende:

• Real-time PCR;
• microfluïdische technologie;
• sequencing en pyrosequencing.

Real-time PCR

Laboratoria gebruiken meestal real-time polymerasekettingreactie, omdat het het aantal foutpositieve resultaten vermindert en het analyseproces zelf een korte tijd kost.

Gezien het grote aantal verborgen vormen van de ziekte en de ineffectiviteit van standaard diagnostische methoden, wordt PCR in toenemende mate gebruikt. Het doel van deze analyse wordt getoond bij:

• verdachte gebieden op de röntgenfoto identificeren;
• twijfelachtige resultaten van tuberculinatie;
• de onmogelijkheid om microscopisch en bacteriologisch onderzoek uit te voeren van sputum bij personen in ernstige toestand;
• het uitvoeren van chirurgische ingrepen wanneer het nodig is om snel te verzekeren dat er geen infectie is;
• de onontvankelijkheid van het gebruik van fluorografie, röntgenfoto's of computertomografie (bijvoorbeeld bij zwangere vrouwen en bij borstvoeding, in geval van overmatige blootstelling aan straling);
• vermoedelijke extrapulmonale tuberculose (aanbevolen wordt niet alleen bloed maar ook slijm te gebruiken).

PCR-diagnostiek van tuberculose heeft zichzelf bewezen bij het onderzoek van kinderen, vanwege het gebrek aan extra blootstelling en snelle resultaten.

Voorbereiding en analyseprocedure

Speciale voorbereiding voor bloed-PCR is niet vereist. Om echter complicaties bij het nemen van bloedmonsters te voorkomen en om materiaal van hoge kwaliteit te verkrijgen, moeten de volgende algemene regels worden gevolgd:

• de analyse dient 's morgens niet eerder te worden gedaan dan 2 uur na het ontwaken;
• Het moet de inname van vet en gefrituurd voedsel een dag vóór het nemen van bloedmonsters beperken;
• afzien van eten, thee en koffie gedurende 8-9 uur, het is toegestaan ​​om schoon water te drinken;
• Rook niet gedurende minstens 3-4 uur.

In het geval van permanente medicatie (hormonen, anticoagulantia, ontstekingsremmers, antibiotica, bloedverdunners), moet u dit aan de laborant melden.

Bij aflevering van sputum moet u uw tanden goed poetsen en uw mond meerdere malen spoelen. Verzamel materiaal in een steriele container. Voor betere resultaten kan 's avonds een slijmoplossend of mucolytisch middel worden ingenomen.

De diagnose zelf bestaat uit verschillende stadia.

Hekmateriaal. Het kan worden uitgevoerd in het laboratorium en op afstand. Sommige soorten materiaal verzamelt de patiënt zelfstandig (urine, slijm).

De vernietiging van de structuur van nucleïnezuren (denaturatie van DNA- en RNA-moleculen). Om dit te doen, wordt het testmateriaal verwarmd tot een temperatuur van 98 graden en gedurende enkele minuten vastgehouden. Dientengevolge worden de dubbele helix afwikkelt, worden enkelstrengs moleculen gevormd.

Joke. Na het toevoegen van een primer (een korte sectie nucleïnezuur), neemt de temperatuur enkele graden af, polymerase wordt geactiveerd.

Elognatsiya. De temperatuur wordt op het optimale niveau gebracht, de enzymactiviteit bereikt een maximum en de tweede keten wordt voltooid volgens de Chargaff-regel van complementariteit.

Om de studie te voltooien, is het noodzakelijk om het vereiste aantal DNA-moleculen te synthetiseren - ongeveer 50 cycli van de bovenstaande reactie. Het duurt ongeveer 2-3 uur. Een positief resultaat van de reactie wijst niet altijd op het actieve stadium van de ziekte, maar is een indicator van de aanwezigheid van een micro-organisme in het lichaam.

Voor- en nadelen van de methode

In vergelijking met andere microbiologische methoden, kost PCR niet veel tijd om Mycobacterium tuberculosis te detecteren met behulp van PCR, het resultaat kan worden verkregen op de dag van testen.

Een ander voordeel is de hoge specificiteit van de analyse, die het mogelijk maakt om de aanwezigheid van de ziekteverwekker te detecteren met een nauwkeurigheid van 90-95% in bijna elk biomateriaal (bloed, urine, uitwerpselen, hersenvocht, sputum, bronchusspoeling).

Er zijn echter verschillende nadelen van de methode:

• een vrij hoog percentage fout-positieve resultaten (tot 15%), wat geassocieerd is met de detectie van niet-levende micro-organismen;
• in sommige gevallen kunt u het feit van de ziekte overslaan, aangezien Mycobacterium tuberculosis vaak wordt onderworpen aan mutaties en het genetisch materiaal verandert;
• lage efficiëntie bij het onderzoek van mensen met immunodeficiëntie;
• hoge kosten van onderzoek, de behoefte aan dure apparatuur en reagentia.

Wat kan worden vervangen?

Gezien de verscheidenheid aan vormen van tuberculose-infectie, voor een meer accurate diagnose en keuze van behandeling, is het noodzakelijk om verschillende diagnostische onderzoeken te combineren:

Verplichte analyse voor kinderen is de Mantoux-test. Als de introductie van tuberculine (genetisch materiaal van mycobacteriën) een uitgesproken reactie is, kan worden aangenomen dat het een infectie met een tuberkelbacillus heeft.

Röntgenmethoden kunnen worden gebruikt om de pathologische focus te visualiseren. Bij de diagnose van extrapulmonale tuberculose worden endoscopische methoden gebruikt bij gelijktijdige biopsie:

• bronchoscopie helpt bij het identificeren van laesies van het strottenhoofd, luchtpijp, bronchiën;
• colonoscopie - darmen;
• cystourethroscopy - organen van het urinestelsel;
• hysteroscopie - vrouwelijke geslachtsorganen. Deze methoden zijn niet specifiek, voor het maken van een nauwkeurige diagnose moet het pathogeen worden geïdentificeerd.

Algemene klinische tests zullen helpen om meer specifiek de toestand van het lichaam te bepalen. Een complete bloedtelling met leukocytenformule is vereist.

Een toename van het aantal neutrofielen met een verlaagd niveau van lymfocyten en een toename van de erythrocytensedimentatiesnelheid (ESR) duidt op een actief ontstekingsproces van bacteriële etiologie. Om schade aan de organen van het urinestelsel uit te sluiten met behulp van een algemene urinalyse en kweek voor steriliteit.

PCR is momenteel beschikbaar in de meeste privélaboratoria. Dit vereist niet alleen hooggekwalificeerde specialisten, maar ook dure apparatuur, een groot aantal reagentia. Daarom is het gebruik van deze methode beperkt, ondanks de hoge nauwkeurigheid en specificiteit.

Voor- en nadelen van PCR (a) voor de diagnose van tuberculose

Een specifieke tuberculose-infectie is al vele jaren aanwezig in menselijke weefsels en structuren en verspreidt zich onder bepaalde omstandigheden snel door het lichaam in 2-3 maanden. Soms is de beste behandeling moeilijk te kiezen vanwege de late diagnose en aanpassing van de ziekteverwekker aan veel geneesmiddelen.

De nieuwste PCR-diagnose van tuberculose helpt niet alleen de ontwikkelde ziekte te ontdekken, maar ook de ziekteverwekker zelf, wanneer de eerste tekenen van de ziekte nog niet zijn verschenen.

Wat is PCR?

Diagnose van tuberculose door PCR is recentelijk verschenen. In 1983 vond een microbioloog uit Amerika, Cary Mullis, een procedure uit waarmee micro-organismen in korte tijd konden worden gereconstrueerd uit biologisch materiaal. Dit werk heeft de Nobelprijs verdiend.

PCR voor tuberculose is een polymeerketenproces waarbij de diagnose en detectie van virale pathogenen door genetische manipulatie plaatsvindt. De techniek wordt gebruikt in immunologische, microbiologische, virologische en biochemische laboratoria.

De universele methode helpt artsen een diagnose te stellen en identificeert een infectieus proces, zelfs na de eerste uren van infectie, lang voor het begin van de symptomen. Onderzoek is mogelijk, zelfs met een kleine hoeveelheid biomateriaal.

Wat is nodig voor analyse?

• Verschillende segmenten van DNA (primers), waarmee de biologische synthese begint;
• Nucleotide-verbindingen, de basis van het DNA-molecuul of RNA;
• Een polymerase-enzym dat PCR-analyse versnelt.

Wat is de basis van de methode?

Eerst wordt een segment van DNA geëxtraheerd uit een biomateriaal van een geïnfecteerde persoon, met behulp van de gen-moleculaire biosynthesewerkwijzen, het type micro-organismen waartoe het biofragment behoort, wordt verder bepaald.

Deze complexe reactie kost minder tijd dan sommige biomethoden. PCR bepaalt het pathogeen in een paar uur, terwijl het niet nodig is om het te isoleren van een biologisch fluïdum (sputum, cerebrospinaal of bloedmedium), het is niet noodzakelijk om het gedurende een lange tijd op een voedingsmedium te laten groeien. Het is voldoende dat het bestudeerde materiaal een DNA-streng van een infectieus pathogeen bevat.

Bij het uitvoeren van een PCR bloedtest op tuberculose in vitro, wordt de synthese van ribonucleïnezuren van de mycobacterium tuberculosis kunstmatig aangemaakt.

Stadia van diagnose

Moleculaire reactie door PCR is een eenvoudige procedure die weinig tijd kost. Het benodigde biomateriaal wordt genomen: bloed, sputum, bronchiale wasvloeistof worden gebruikt om de tec.

1. Eerst wordt de primaire vorm van DNA vernietigd, twee kettingen worden gescheiden bij hoge temperatuur (maximaal 98 ° C gedurende niet meer dan 2 minuten);
2. Vervolgens wordt uitgloeien uitgevoerd, de primaire temperatuur wordt verminderd door verschillende verdelingen, de DNA-streng wordt gekoppeld aan de primer;
3. Het volgende stadium wordt elongatie genoemd, met de biosynthese van de noodzakelijke moleculaire structuren.

Om het vereiste aantal kopieën van DNA te verkrijgen, moet van 25 tot 30 dergelijke cycli worden doorlopen en het resulterende aantal mycobacteriën wordt gemakkelijk herkend.

Is het nodig om PCR te doen voor tuberculose?

Rechtstreeks voor alle patiënten met een vermoedelijke TVC, worden kettingdiagnoses niet uitgevoerd, omdat de procedure het gebruik van dure apparatuur vereist. Niet alle medische staatsinstellingen staan ​​toe dat het wordt gekocht, vooral omdat de gebruikelijke methoden voor het diagnosticeren van mycobacterium tuberculosis ook informatief zijn.

• Zorgvuldige geschiedenisverhalen, de patiënt in vraag stellen;
• Extern onderzoek;
• Mantoux-tuberculinetest;
• Radiografisch of fluorografisch onderzoek;
• Indien nodig, computerdiagnostiek;
• Microscopisch of bacteriologisch onderzoek van het masker met sputum.

PCR voor tuberculose wordt alleen gedaan wanneer het niet mogelijk is om nog een instrumentele analyse uit te voeren of in omstandigheden die moeilijk te diagnosticeren zijn.

Ondanks het feit dat een groot aantal diagnostische methoden zijn uitgevonden, blijft het aantal patiënten met tuberculose groeien. Bovendien heeft de incidentie enkele kenmerken gekregen: een ernstige vorm van de ziekte wordt vaak waargenomen, het aantal sterfgevallen neemt toe, het pathogeen wordt resistent tegen bestaande chemotherapiedrugs.

Veel mensen willen niet elk jaar een routine-inspectie ondergaan, vaccinatie weigeren, wat leidt tot een toename van de incidentie. Dergelijke omstandigheden vereisen effectieve en informatieve onderzoeksmethoden die beschikbaar zijn voor volwassenen en kinderen met de diagnose tbc. PCR heeft voordelen ten opzichte van andere diagnostische methoden.

Wat is de waarde van de methode?

Dit nieuwste onderzoek heeft zichzelf goed bewezen. Als het om een ​​aantal redenen moeilijk is om een ​​diagnose te stellen of, in sommige controversiële gevallen, detecteert PCR de tuberkelbacillus gemakkelijker in biologisch materiaal dan andere methoden.

• Deze snelle studie, een klein deel van het molecuul, maakt het mogelijk om in een korte tijd een accurate diagnose te stellen in ongeveer 5 uur, dit wordt bijvoorbeeld gebruikt in noodgevallen voor een dringende chirurgische ingreep;
• Een bloedtest voor tuberculose is mogelijk wanneer andere methoden niet beschikbaar zijn of gecontra-indiceerd - soms moet voor de detectie van de tbc-ziekteverwekker veel Rg-shots worden genomen, waarbij de stralingsdosis te groot is;
• Met behulp van de polymerasereactie kunnen biologische vloeistoffen worden onderzocht op de aanwezigheid van mycobacteriën. U kunt bijvoorbeeld een studie van hersenvocht met tuberculeuze meningitis of urine met urogenitale tuberculose doen;
• De methode is veilig, de diagnose van tuberculose bij kinderen met PCR veroorzaakt geen problemen;
• De methode van polymeerreactie onthult een tuberkelbacil in alle vormen en stadia van de ziekte;
• De aanwezigheid van slechts een paar bacteriën in het biomateriaal stelt u in staat om de aanwezigheid van micro-organismen te zien, omdat dit een gevoelige reactie is;
• PCR diagnosticeert gemakkelijk de herhaling van de ziekte.

Ondanks het enorme aantal voordelen, zijn alle patiënten met verdenking op een tbc-studie nog niet klaar, aangezien er ook nadelen zijn, ze worden ook in aanmerking genomen.

video

Video - vroege diagnose

Wat zijn de nadelen?

Deze diagnosemethode is eerder uitzonderlijk dan natuurlijk, hiervoor zijn er redenen. Allereerst wordt rekening gehouden met de hoge kosten van de methode. De apparatuur is duur, openbare klinieken hebben niet de mogelijkheid om het te kopen vanwege de hoge prijs, maar de meeste van de betaalde laboratoria hebben de apparatuur, ze worden geanalyseerd.

• De methode detecteert dode bacteriën die zijn gestorven na behandeling, terwijl PCR een positief resultaat laat zien. Direct na chemotherapie heeft het geen zin om een ​​onderzoek uit te voeren, omdat het resultaat onbetrouwbaar is;
• Mycobacterium tuberculosis-mutaties zijn gevoelig, wat leidt tot inefficiëntie van de methode en de DNA-streng kan niet consistent worden gesynthetiseerd.

De omgeving voor het onderzoek moet zorgvuldig worden geselecteerd, bloed of urine kan alleen worden verzameld als er een vermoeden van infectie bestaat. Sputum mag niet worden gebruikt voor onderzoek als er bottuberculose wordt vermoed. In deze situatie is de diagnose onjuist.

Het bloed en de urine van een patiënt met tuberculose die op PCR moet worden onderzocht, wordt zelden genomen, de identificatie van de ziekte op deze manier is twijfelachtig. In deze biologische media wordt het pathogeen alleen in sepsis of in het geval van gedissemineerde tuberculose bepaald. Lokale vormen komen het meest voor, met hun bloed en urine kunnen ze ongewijzigd blijven. Meestal wordt slijm genomen voor onderzoek.

Wie laat de analyse zien?

De meeste patiënten worden gestuurd voor PCR-diagnose in controversiële en moeilijke gevallen van tuberculose. Wanneer geven medische professionals doorverwijzingen voor onderzoek?

1. Als er contact is met een persoon die op betrouwbare wijze is gediagnosticeerd met tuberculose, maar het is moeilijk om een ​​diagnose te stellen met behulp van conventionele methoden;
2. In die omstandigheden, als de patiënt om de kliniek te bieden onmogelijk is voor radiografie of ander onderzoek. In een dergelijke situatie is het gemakkelijker om het te inspecteren met behulp van de polymeermethode. Sputum-analyse wordt eenvoudig in een speciale container aan het laboratorium afgeleverd en het resultaat wordt na enkele uren bekend;
3. Vóór de operatie is het dringend noodzakelijk om te bepalen of de patiënt ziek is van tuberculose, in welk geval PCR is geïndiceerd;
4. Vanwege de veiligheid van de methode is het mogelijk om een ​​onderzoek van een zwangere vrouw of een kind uit te voeren, zonder een extra röntgenbelasting te creëren;
5. Twijfelachtige Mantoux-testresultaten.

Iedereen die wil kan worden onderzocht voor een vergoeding als tuberculose niet is bevestigd met behulp van bacteriologie en fluoroscopie. Dit gebeurt als de laesie in het longweefsel onzichtbaar is in het Rg-beeld in een directe projectie en de patiënt niet in staat is om sputum correct te verzamelen, maar de tekenen van menselijke tuberculose zijn verstoord.

Moderne PCR-reactie voor diagnose is de sleutel tot een succesvolle behandeling, waardoor de prevalentie van de ziekte afneemt. Traditionele methoden voor het identificeren van kwalen produceren niet altijd het gewenste effect.

Dus PCR-analyse tot nu toe is uitgegroeid tot een van de betrouwbare en veilige methoden voor diagnose in de vroege stadia van de ziekte.